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[求助]
PCR后跑膠沒有任何條帶 已有17人參與
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自己設(shè)計(jì)了10對(duì)引物，跑膠沒有任何條帶，10對(duì)引物都沒有出條帶，可能原因是什么？是不是說明引物設(shè)計(jì)的不好？ 因?yàn)椋?.同樣的cDNA，用別人的引物（同一植物的其他基因引物）就有條帶。2.做了溫度梯度PCR，每個(gè)溫度梯度都沒有條帶，3 用引物直接跑膠，引物有條帶，說明引物存在（我擔(dān)心稀釋的時(shí)候引物不小心散出來），4 ，請(qǐng)問還能做些什么來找出問題產(chǎn)生的原因 可是設(shè)計(jì)引物的時(shí)候什么二聚體，錯(cuò)配，跨內(nèi)含子的網(wǎng)上書上找到的哪些能注意的我都注意了，為什么沒有條帶，請(qǐng)問引物設(shè)計(jì)還要注意什么？ |
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chiden
木蟲 (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流！ 2014-01-16 21:29:05
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1. 你可以再試試用Genomic DNA跑PCR，做一個(gè)陽性對(duì)照，就是你所說的別人的引物。如果有條帶，那么原因可能出現(xiàn)在引物設(shè)計(jì)時(shí)設(shè)計(jì)在了內(nèi)含子上或者剛好跨內(nèi)含子了。 也有可能原因不出現(xiàn)在設(shè)計(jì)上： 2. 重新比對(duì)你的引物序列是否在送往公司合成時(shí)序列給錯(cuò)，我們實(shí)驗(yàn)室出現(xiàn)過這樣的情況哈 3. R端引物送合成時(shí)有沒有反向，有的軟件設(shè)計(jì)時(shí)不會(huì)自動(dòng)反向的，需調(diào)整。 4. 引物稀釋時(shí)有沒有搞混？ |
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額敏的雪
5樓2014-01-16 20:32:35
冰封之real
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