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綠松石6727新蟲 (小有名氣)
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[求助]
BL21大腸桿菌質(zhì)粒提取 已有4人參與
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師兄將pMAL轉(zhuǎn)入了BL21類大腸桿菌中，我用氨芐抗性的培養(yǎng)基搖菌12小時(shí)后提質(zhì)粒，濃度只能提到幾十ng,請(qǐng)問(wèn)表達(dá)蛋白的菌株是不是不適合做質(zhì)粒提��？ @biostar2009 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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5樓2016-07-15 09:54:20
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【答案】應(yīng)助回帖
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12小時(shí)能提到幾十ng已經(jīng)很不錯(cuò)了。1.培養(yǎng)16-18小時(shí)；2.溶液3后，離心上清放在柱子里室溫孵育時(shí)間延長(zhǎng)；3.酒精洗的時(shí)候不洗第二次；4.洗脫時(shí)，EB孵育時(shí)間延長(zhǎng)，可將EB加熱至70度后使用。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
12樓2016-07-18 23:02:39
Huobol
至尊木蟲 (著名寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2016-07-15 07:26:33
xn8008: 應(yīng)助指數(shù)+1 2016-07-16 09:27:28
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xn8008: 應(yīng)助指數(shù)+1 2016-07-16 09:27:28
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可以做3管或4管，每?jī)扇辽^(guò)夜菌液一管，離心所得上清液分批次加到一個(gè)吸附柱中，這樣濃度應(yīng)該會(huì)多的吧。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2016-07-14 18:03:31
綠松石6727
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3樓2016-07-14 19:11:47
不愛(ài)做實(shí)驗(yàn)
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4樓2016-07-15 09:36:08
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xn8008: 金幣+1, 歡迎發(fā)帖交流 2016-07-16 09:27:39
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表達(dá)菌株拷貝量低，而且有背景質(zhì)粒，既bl21自身的質(zhì)粒，非常不建議用表達(dá)菌提質(zhì)粒 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
6樓2016-07-15 21:47:08
小冀-
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7樓2016-07-17 14:35:18
bright8
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搖時(shí)間長(zhǎng)一點(diǎn)了，菌量多加一點(diǎn),現(xiàn)在試劑盒提取來(lái)的量應(yīng)該還好吧！ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
8樓2016-07-18 12:11:05
9樓2016-07-18 13:39:39
10樓2016-07-18 17:07:30
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