 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 4629 | 回復(fù): 15 | ||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
烏托小邦木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
小蟲(chóng)蟲(chóng)
|
[求助]
關(guān)于Cas9-sgRNA構(gòu)建的困惑，質(zhì)粒一直提不出來(lái)，向大家求助�。�
|
|
|
最近在試著做Cas9，想敲掉一個(gè)基因，選擇了六個(gè)靶點(diǎn)。其中四個(gè)sgRNA很順利就連進(jìn)Cas9載體了，但是有兩個(gè)靶點(diǎn)的sgRNA死活弄不出來(lái)，退火-連接-轉(zhuǎn)化-挑斑-菌液PCR都沒(méi)有問(wèn)題（菌液PCR100%正確），然后我就抽提質(zhì)粒送去測(cè)序。 1）測(cè)序公司告訴我質(zhì)粒電泳沒(méi)有條帶，一片模糊； 2）我就自己也跑了電泳，確實(shí)永遠(yuǎn)都是一片模糊的； 3）然后我就懷疑是不是質(zhì)粒抽提試劑盒壞了，我就直接拿菌液送去測(cè)序，測(cè)序公司（兩家）也說(shuō)抽提不出來(lái)質(zhì)粒； 4）但是我拿菌液劃線，是能正常長(zhǎng)斑的； 5）抽提的質(zhì)粒重新轉(zhuǎn)化卻啥也沒(méi)長(zhǎng)； 6）換了一家合成引物的公司，重新合成引物，結(jié)果依舊； 7）已經(jīng)做了三次了，抽提試劑盒也換了新的，都是這樣的，問(wèn)題到底出在哪里呢？有這方面經(jīng)驗(yàn)的大神能指點(diǎn)一下不？ 我用的這個(gè)載體是14kb，是因?yàn)檩d體太大嗎？如果是這個(gè)原因的話，為什么另外四個(gè)很順利成功呢？ 關(guān)于Cas9技術(shù)，我今年剛接觸，不是太懂，異想天開(kāi)一下：會(huì)不會(huì)是這兩個(gè)靶點(diǎn)跟component cell里的某個(gè)基因匹配，cas9在component cell里發(fā)生切割作用了？（我也不知道這個(gè)時(shí)候Cas9是否能發(fā)揮作用，實(shí)在是想不出問(wèn)題在哪，瞎猜的。。） 求幫助，求指點(diǎn)！ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有278人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
邵陽(yáng)學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
不吃M的魚(yú)
金蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 2134.6
- 紅花: 1
- 帖子: 78
- 在線: 17.4小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1646205
- 注冊(cè): 2012-02-27
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物物理、生物化學(xué)與分子
4樓2016-08-06 08:02:57
yunsmile2016
新蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 265.3
- 散金: 90
- 紅花: 2
- 帖子: 163
- 在線: 15.8小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 4863857
- 注冊(cè): 2016-07-23
- 專業(yè): 組織工程與再生醫(yī)學(xué)
2樓2016-08-03 23:13:55
3樓2016-08-06 00:32:08
烏托小邦
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
小蟲(chóng)蟲(chóng)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 5132.5
- 散金: 275
- 紅花: 10
- 帖子: 469
- 在線: 210.2小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1221588
- 注冊(cè): 2011-03-04
- 性別: GG
- 專業(yè): 支氣管哮喘
5樓2016-08-08 10:19:24
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 0703化學(xué) +11 | 妮妮ninicgb 2026-03-27 | 11/550 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 調(diào)劑310 +7 | 溫柔的晚安 2026-03-25 | 8/400 |
|
|
|
[碩博家園] 求調(diào)劑 有機(jī)化學(xué)考研356分 +3 | Nadiums 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
[考研] 材料學(xué)碩333求調(diào)劑 +10 | 北道巷 2026-03-24 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 一志愿北京工業(yè)大學(xué)，324分求調(diào)劑 +4 | 零八# 2026-03-28 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 347求調(diào)劑 +3 | 山頂見(jiàn)α 2026-03-25 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 305求調(diào)劑 +5 | 哇盧卡庫(kù) 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 312求調(diào)劑 +9 | 上岸吧ZJY 2026-03-22 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 材料求調(diào)劑 +5 | .m.. 2026-03-25 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿吉大071010，316分求調(diào)劑 +3 | xgbiknn 2026-03-27 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 284求調(diào)劑 +11 | junqihahaha 2026-03-26 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 342求調(diào)劑 +3 | 加油a李zs 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿北化求調(diào)劑 +3 | Jsman 2026-03-22 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)求調(diào)劑 +3 | 丹青奶蓋 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料與化工304求B區(qū)調(diào)劑 +3 | 邱gl 2026-03-25 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0854AI CV方向招收調(diào)劑 +4 | 章小魚(yú)567 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 086003食品工程求調(diào)劑 +6 | 淼淼111 2026-03-24 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 318求調(diào)劑 +3 | plum李子 2026-03-23 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 化工專碩求調(diào)劑 +3 | question挽風(fēng) 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 275求調(diào)劑 +6 | shansx 2026-03-22 | 8/400 |
|