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小李紙11銀蟲(chóng) (正式寫手)
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[求助]
酵母電轉(zhuǎn)效率低 已有2人參與
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| 重組質(zhì)粒線性化后電擊轉(zhuǎn)化畢赤酵母，2100V，200歐，25微F，轉(zhuǎn)化后涂YPSD（博萊霉素抗性）平板，第一次長(zhǎng)了兩個(gè)菌落，第二次一個(gè)都沒(méi)長(zhǎng)，整體轉(zhuǎn)化效率極低，請(qǐng)問(wèn)什么原因呢？ |
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云水棲心
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我的畢業(yè)實(shí)驗(yàn)的一部分和你一樣，只是長(zhǎng)得超級(jí)多。你的博萊霉素抗性濃度是多少��？感受態(tài)是現(xiàn)制的嗎？ 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
2樓2016-11-14 16:15:22
小冀-
版主 (著名寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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是不是感受太的問(wèn)題啊~電轉(zhuǎn)之后加復(fù)蘇液要快 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
3樓2016-11-14 17:32:56
小李紙11
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嗯嗯，感受態(tài)是現(xiàn)做的，博萊霉素濃度100微克每毫升。。。不知道是什么問(wèn)題。感受態(tài)制備步驟如下： (1) 感受態(tài)的制備： a) 挑取酵母受體菌的單菌落接種于 10mLYPD 培養(yǎng)基中，30℃搖床過(guò)夜。 b) 以 1 %接種量轉(zhuǎn)接 100mLYPD 液體培養(yǎng)基，30℃搖床過(guò)夜至 OD=1.3-1.5。 c) 4℃離心 5000rpm,5min,棄上清。 d) 用 100mL 冰預(yù)冷無(wú)均水將菌體重懸。 e) 4℃離心 5000rpm,10min,棄上清。 f) 用 50mL 冰預(yù)冷無(wú)均水將菌體重懸。 g) 4℃離心 5000rpm,10min,棄上清。 h) 再用 20mL 1 mol/L 的山梨醇洗滌 1 次 i) 溶于 200uL 1mol/L 的冰預(yù)冷的山梨醇，以備轉(zhuǎn)化 |
4樓2016-11-14 19:02:54
小李紙11
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哦哦，感受態(tài)是這么做的： a) 挑取酵母受體菌的單菌落接種于 10mLYPD 培養(yǎng)基中，30℃搖床過(guò)夜。 b) 以 1 %接種量轉(zhuǎn)接 100mLYPD 液體培養(yǎng)基，30℃搖床過(guò)夜至 OD=1.3-1.5。 c) 4℃離心 5000rpm,5min,棄上清。 d) 用 100mL 冰預(yù)冷無(wú)均水將菌體重懸。 e) 4℃離心 5000rpm,10min,棄上清。 f) 用 50mL 冰預(yù)冷無(wú)均水將菌體重懸。 g) 4℃離心 5000rpm,10min,棄上清。 h) 再用 20mL 1 mol/L 的山梨醇洗滌 1 次 i) 溶于 200uL 1mol/L 的冰預(yù)冷的山梨醇，以備轉(zhuǎn)化 |
5樓2016-11-14 19:04:36
仁者無(wú)敵2013
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6樓2016-11-15 09:35:12
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【答案】應(yīng)助回帖
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轉(zhuǎn)化后，需要30℃靜置培養(yǎng)兩小時(shí)后離心平鋪。你的一個(gè)板鋪多少微升的菌液？ 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
7樓2016-11-16 09:10:34
8樓2016-11-16 09:14:18
ganchao1776
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電壓有點(diǎn)高，1800V效果比較好，我以前都用這個(gè)電壓。那兩個(gè)長(zhǎng)出來(lái)的很可能表達(dá)會(huì)很好 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
9樓2016-11-18 19:15:29
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