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小李紙11銀蟲 (正式寫手)
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[求助]
酵母電轉(zhuǎn)效率低 已有2人參與
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| 重組質(zhì)粒線性化后電擊轉(zhuǎn)化畢赤酵母，2100V，200歐，25微F，轉(zhuǎn)化后涂YPSD（博萊霉素抗性）平板，第一次長了兩個(gè)菌落，第二次一個(gè)都沒長，整體轉(zhuǎn)化效率極低，請(qǐng)問什么原因呢？ |
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云水棲心
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我的畢業(yè)實(shí)驗(yàn)的一部分和你一樣，只是長得超級(jí)多。你的博萊霉素抗性濃度是多少��？感受態(tài)是現(xiàn)制的嗎？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2016-11-14 16:15:22
小冀-
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3樓2016-11-14 17:32:56
小李紙11
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嗯嗯，感受態(tài)是現(xiàn)做的，博萊霉素濃度100微克每毫升。。。不知道是什么問題。感受態(tài)制備步驟如下： (1) 感受態(tài)的制備： a) 挑取酵母受體菌的單菌落接種于 10mLYPD 培養(yǎng)基中，30℃搖床過夜。 b) 以 1 %接種量轉(zhuǎn)接 100mLYPD 液體培養(yǎng)基，30℃搖床過夜至 OD=1.3-1.5。 c) 4℃離心 5000rpm,5min,棄上清。 d) 用 100mL 冰預(yù)冷無均水將菌體重懸。 e) 4℃離心 5000rpm,10min,棄上清。 f) 用 50mL 冰預(yù)冷無均水將菌體重懸。 g) 4℃離心 5000rpm,10min,棄上清。 h) 再用 20mL 1 mol/L 的山梨醇洗滌 1 次 i) 溶于 200uL 1mol/L 的冰預(yù)冷的山梨醇，以備轉(zhuǎn)化 |
4樓2016-11-14 19:02:54
小李紙11
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哦哦，感受態(tài)是這么做的： a) 挑取酵母受體菌的單菌落接種于 10mLYPD 培養(yǎng)基中，30℃搖床過夜。 b) 以 1 %接種量轉(zhuǎn)接 100mLYPD 液體培養(yǎng)基，30℃搖床過夜至 OD=1.3-1.5。 c) 4℃離心 5000rpm,5min,棄上清。 d) 用 100mL 冰預(yù)冷無均水將菌體重懸。 e) 4℃離心 5000rpm,10min,棄上清。 f) 用 50mL 冰預(yù)冷無均水將菌體重懸。 g) 4℃離心 5000rpm,10min,棄上清。 h) 再用 20mL 1 mol/L 的山梨醇洗滌 1 次 i) 溶于 200uL 1mol/L 的冰預(yù)冷的山梨醇，以備轉(zhuǎn)化 |
5樓2016-11-14 19:04:36
仁者無敵2013
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6樓2016-11-15 09:35:12
云水棲心
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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轉(zhuǎn)化后，需要30℃靜置培養(yǎng)兩小時(shí)后離心平鋪。你的一個(gè)板鋪多少微升的菌液？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
7樓2016-11-16 09:10:34
8樓2016-11-16 09:14:18
ganchao1776
至尊木蟲 (職業(yè)作家)
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9樓2016-11-18 19:15:29
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