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y383514131銀蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
菌落pcr該怎么做 已有25人參與
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最近做菌落pcr總是做不出來(lái)，而提基因組或提質(zhì)粒后再進(jìn)行pcr都是可以p出來(lái)的，求做菌落pcr注意事項(xiàng)，細(xì)節(jié)，個(gè)人經(jīng)驗(yàn)等 @youlinglyw 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
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挑菌落時(shí)選平皿上的單菌落，非常小的剛長(zhǎng)出的那種，用無(wú)菌槍頭刮下，放到10微升的無(wú)菌水?dāng)嚢�，外觀看起來(lái)稍微有點(diǎn)混濁。然后pcr時(shí)20微體系模板加1～5微就夠了 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
10樓2016-11-16 13:04:00
xiaominzheng
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看大家好多都是用的槍頭挑菌，小建議：用牙簽的尖尖沾一下確定碰著菌就好，然后抖兩下就可以了。 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
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38樓2016-11-22 22:31:09
hubeigxkkk
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23樓2016-11-17 17:33:59
siyuansing
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我都是挑菌到400ul的LB里，取1ul當(dāng)做模板進(jìn)行PCR，剩下的在37度培養(yǎng)。菌液PCR能做出來(lái)的再在試管培養(yǎng)，保種測(cè)序。菌液PCR能做出來(lái)的都有，做不出來(lái)的都沒(méi)有。 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
36樓2016-11-20 22:07:42
wangxiao318
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如果是平板，挑菌時(shí)沾一點(diǎn)就行，不要以肉眼看到作標(biāo)準(zhǔn)，預(yù)變性時(shí)間稍長(zhǎng)些，以你的菌種類型來(lái)定。如果是搖的菌液，最好是取新鮮的，生長(zhǎng)狀態(tài)最好時(shí)的，1微升足矣。另外，實(shí)驗(yàn)時(shí)加上對(duì)照，陰性的，陽(yáng)性的，便于排查。 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
26樓2016-11-18 08:15:56
小冀-
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| 挑菌的時(shí)候挑少點(diǎn)，不要太多，否則p出來(lái) |
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2樓2016-11-16 08:47:55
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挑菌使用鑷子夾取10ul槍頭挑菌 在配好體系的pcr管中沾1-2下即可 會(huì)不會(huì)是挑菌摳到太多培養(yǎng)基 實(shí)際上菌落并沒(méi)有接觸到管中的液體，你的pcr沒(méi)有模板所以擴(kuò)不出來(lái) [ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
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3樓2016-11-16 09:02:17
y383514131
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我也在驗(yàn)證菌落量的問(wèn)題，今天可以看結(jié)果了 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
16樓2016-11-17 08:19:33
上官鳳舞
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陽(yáng)性菌的話，需要破壁，加溶菌酶作用，或者反復(fù)沸水煮冰上凍，最后離心即可 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
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18樓2016-11-17 08:49:37
hattie919822
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33樓2016-11-18 17:10:24
remain2018
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挑單菌落，一點(diǎn)就夠。然后pcr時(shí)20微體系模板加1微升，實(shí)在P不出來(lái)，用特異性引物試試 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
64樓2016-11-30 19:48:48
wenwanhong
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菌落pcr，我一般都是用小槍頭粘一小坨用槍吹打入預(yù)混液當(dāng)中，在pcr儀上99℃10min破菌，然后再加taq酶進(jìn)行pcr，屢試不爽  試一下吧，預(yù)祝成功發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
81樓2016-12-21 16:37:41
緣來(lái)是伊
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這個(gè)得看你的菌種，如果是大腸的話很容易的，如果是其他尤其是陽(yáng)性菌的話需要裂解液裂解一下再做 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
88樓2016-12-30 18:49:49
a13515517892
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[考研] 305分求調(diào)劑（食品工程） +5 | Sxy112 2026-03-21 | 7/350 |
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[考研]
 085404電子信息284分求調(diào)劑
+4
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13659058978 2026-03-24 | 4/200 |
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[考研] 一志愿河北工業(yè)大學(xué)0817化工278分求調(diào)劑 +7 | jhybd 2026-03-23 | 12/600 |
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[考研] 一志愿國(guó)科過(guò)程所081700，274求調(diào)劑 +3 | 三水研0水立方 2026-03-23 | 3/150 |
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