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比較CT值法實(shí)時(shí)定量擴(kuò)增效率可直接用反轉(zhuǎn)錄的cDNA稀釋做模板嗎? 已有1人參與
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比較CT值法實(shí)時(shí)定量,檢測(cè)目的基因和內(nèi)參擴(kuò)增效率,可以直接用反轉(zhuǎn)錄的cDNA稀釋做模板嗎?還是必須把目的基因和內(nèi)參構(gòu)建質(zhì)粒,測(cè)濃度,稀釋做模板? 還有擴(kuò)增效率在什么范圍內(nèi)可以接受?謝謝! |


銀蟲(chóng) (小有名氣)
| 相對(duì)定量引物的擴(kuò)增效率,一般情況是不需要構(gòu)建質(zhì)粒的。只有在特殊的情況,比如說(shuō)你的引物特異不好容易擴(kuò)增到其他的序列上,為了更嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)就會(huì)把基因用普通pcr擴(kuò)增然后測(cè)序比對(duì)一下,但是是不需要構(gòu)建載體的。只有絕對(duì)定量需要構(gòu)建質(zhì)粒作為標(biāo)準(zhǔn)品。擴(kuò)增效率一般要在95%-105%之間這個(gè)算是不錯(cuò)的,這個(gè)擴(kuò)增效率做實(shí)驗(yàn)是沒(méi)有問(wèn)題的。 |
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)



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