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比較CT值法實時定量擴增效率可直接用反轉(zhuǎn)錄的cDNA稀釋做模板嗎？ 已有1人參與
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比較CT值法實時定量，檢測目的基因和內(nèi)參擴增效率，可以直接用反轉(zhuǎn)錄的cDNA稀釋做模板嗎？還是必須把目的基因和內(nèi)參構(gòu)建質(zhì)粒，測濃度，稀釋做模板？ 還有擴增效率在什么范圍內(nèi)可以接受？謝謝！  |
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2樓2016-12-26 11:48:38
peitaokong
銀蟲 (小有名氣)
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
yghboy168: 金幣+10, ★★★很有幫助 2016-12-27 09:27:40
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yghboy168: 金幣+10, ★★★很有幫助 2016-12-27 09:27:40
| 相對定量引物的擴增效率，一般情況是不需要構(gòu)建質(zhì)粒的。只有在特殊的情況，比如說你的引物特異不好容易擴增到其他的序列上，為了更嚴(yán)格的實驗就會把基因用普通pcr擴增然后測序比對一下，但是是不需要構(gòu)建載體的。只有絕對定量需要構(gòu)建質(zhì)粒作為標(biāo)準(zhǔn)品。擴增效率一般要在95%-105%之間這個算是不錯的，這個擴增效率做實驗是沒有問題的。 |
3樓2016-12-26 11:53:40
Liumengya
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4樓2016-12-26 12:17:34
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