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環(huán)游世界U新蟲 (初入文壇)
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[求助]
Ct法實(shí)時(shí)熒光定量 PCR分析標(biāo)準(zhǔn)菌株和樣品的循環(huán)數(shù)，怎么控制二者濃度在同一水平？
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剛開始接觸real-time pcr，參考奶粉中阪崎腸桿菌熒光定量PCR檢測(cè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SN/T 1632.3-2005，準(zhǔn)備開發(fā)益生菌動(dòng)物雙歧桿菌乳亞種BB12的鑒定方法，主要思路如下： 采用動(dòng)物雙歧桿菌乳亞種標(biāo)準(zhǔn)菌株（ATCC 27536）作為標(biāo)準(zhǔn)品，以添加BB12配方奶粉為樣品，分別提取DNA，通過(guò)熒光定量PCR測(cè)定對(duì)應(yīng)循環(huán)數(shù)Ct值，比較標(biāo)準(zhǔn)品與樣品Ct值，結(jié)合微生物生化鑒定結(jié)果，實(shí)現(xiàn)雙歧桿菌亞種的鑒定，參考一篇英文文獻(xiàn)，樣品與標(biāo)菌的CT值基本吻合，且CT值≤27，報(bào)告檢出BB12。 請(qǐng)給位大神指導(dǎo)一下，需不需要調(diào)節(jié)標(biāo)菌和樣品的濃度一致？是要調(diào)控菌懸液中菌落數(shù)一致，還是cDNA或者其他？具體怎么操作呢？ 根據(jù)文獻(xiàn)內(nèi)容，選了一個(gè)內(nèi)參基因RPL32，可是在Genbank中沒找到對(duì)應(yīng)的基因序列，在EMBL和DDBJ數(shù)據(jù)庫(kù)中也未找到，求大神指導(dǎo)~~~PS：可否用內(nèi)參基因來(lái)校準(zhǔn)樣品與標(biāo)品的濃度差呢？ |
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