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zhangdie新蟲 (初入文壇)
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[求助]
請問驗證cds全長序列設(shè)計引物(cDNA模板)，后二十堿基幾乎沒有GC怎么辦
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為了設(shè)計這個引物我查了好多資料，pp5也下了學了但是驗證cds的引物基本上只有前二十和后二十這種設(shè)計法，但我下游引物用了最后二十四個堿基CG含量才大概20%，退火溫度五十都不到，跑出條帶做了連接轉(zhuǎn)化但結(jié)果都不是目的基因。有人說用utr區(qū)設(shè)計，但是我5‘utr只有十五個已知堿基，是需要先做個5race嗎？或者前輩們有什么別的方法？求指點謝謝 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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提取完RNA后逆轉(zhuǎn)錄時用特異性引物ATATATAT…（你不是說下游是二十來個AT重復(fù)嗎？）這樣可以大大提高后面PCR擴增幾率～ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
13樓2017-01-07 06:38:30
MAS_rice
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能擴出來應(yīng)該可以用吧，要不然你把這個擴出來的前段連個T載，再測序看看是不是目的前段 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2017-01-03 23:20:27
zhangdie
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3樓2017-01-04 15:41:08
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4樓2017-01-04 22:12:15
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