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我是一只老年新蟲 (初入文壇)
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[求助]
為何小樣誘導(dǎo)有條帶，大量誘導(dǎo)后目的條帶幾乎沒(méi)了？ 已有1人參與
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如圖1是預(yù)誘導(dǎo)時(shí)的圖，使用的載體是PET-32a，目的蛋白大小約66.2kDa。小樣預(yù)誘導(dǎo)時(shí)，由于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的小型超聲波破碎儀壞了，跑的膠是全菌（未破碎），條帶顯示有我的目的條帶，小樣誘導(dǎo)的條件是：先搖菌2.5h-3h后，加IPTG 16° 誘導(dǎo)20h。 然后再大量搖菌，每瓶300ml，IPTG濃度取0.3M，搖菌4h后，加IPTG 16°誘導(dǎo)20h后用大型低溫高壓破碎儀破碎，破碎后發(fā)現(xiàn)有白色的乳狀物體？？（如圖2）然后離心取上清液過(guò)鎳柱，用不同濃度咪唑洗脫。 可是跑膠發(fā)現(xiàn)我的目的蛋白濃度很低，甚至不如雜蛋白濃度。尤其是第一個(gè)孔那里的上清液中的目的蛋白濃度很低，（如圖3）求助大神，為何小樣誘導(dǎo)時(shí)條帶很亮，而大量誘導(dǎo)反而濃度低了？是我大量誘導(dǎo)的條件需要改變還是蛋白在沉淀中表達(dá)？如果在沉淀中表達(dá)的話，如何才能純化出來(lái)呢？謝謝��！ 1.蛋白小樣預(yù)誘導(dǎo)（沒(méi)破碎，跑的全菌） 2.蛋白大量破碎后有白色乳狀沉淀 3.大量誘導(dǎo)后過(guò)柱圖，上清液中目的蛋白量少 |
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5樓2017-06-16 17:21:35
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