 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 5584 | 回復(fù): 9 | |||||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | |||||
[交流]
Western Blot 磷酸化蛋白測定問題 已有8人參與
|
|||||
|
WB菜鳥最近做ERK蛋白表達(dá) 用的碧云天的Western及IP細(xì)胞裂解液（說明說適用于磷酸化蛋白的Western檢測） 伯樂半干轉(zhuǎn)膜 恒壓20V，25min 5%脫脂奶室溫?fù)u床封閉1h 一抗室溫?fù)u床1h，4度過夜 HRP標(biāo)記的二抗室溫?fù)u床孵育1小時 TMB顯色 結(jié)果：ERK蛋白表達(dá)有條帶 p-ERK在NC膜上只有預(yù)染Marker沒有任何條帶或是背景 請教WB達(dá)人為什么p-ERK會是這樣的情況，還有這個問題要怎么解決？ 各位大俠賜教呀�。�！ [ Last edited by amisking on 2009-10-15 at 22:05 ] |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 蛋白質(zhì)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn) | 免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn) |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
miandui» 猜你喜歡
【求調(diào)劑】新能源材料本科，一志愿211，初試321
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
材料考研調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
材料調(diào)劑
已經(jīng)有12人回復(fù)
-
英一數(shù)一408，總分284，二戰(zhàn)真誠求調(diào)劑
已經(jīng)有14人回復(fù)
-
085410 一志愿211 22408分?jǐn)?shù)359求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
271求調(diào)劑
已經(jīng)有19人回復(fù)
-
385分 生物學(xué)（071000）求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
一志愿安徽大學(xué)計(jì)算機(jī)科學(xué)與技術(shù)學(xué)碩，331分求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
318求調(diào)劑，計(jì)算材料方向
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
291求調(diào)劑
已經(jīng)有25人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對您同樣有幫助:
- western blot中蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)印問題
已經(jīng)有17人回復(fù)
- Western Blot實(shí)驗(yàn)的蛋白條帶都連在一起
已經(jīng)有37人回復(fù)
- 請教western blot 時蛋白稀釋液情況
已經(jīng)有4人回復(fù)
- WB檢測磷酸化蛋白
已經(jīng)有41人回復(fù)
- Western blot 檢測胱氨酸谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白表達(dá)
已經(jīng)有6人回復(fù)
- Western Blot電泳蛋白質(zhì)外漏問題求助
已經(jīng)有22人回復(fù)
- 【求助/交流】純化酶切后的膜蛋白做Western blot沒條帶，why？
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 【求助/交流】信號通路如何研究？
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 【求助/交流】有關(guān)western-blot的一些問題
已經(jīng)有18人回復(fù)
凌波麗
專家顧問 (知名作家)
-
專家經(jīng)驗(yàn): +218 - BioEPI: 11
- 應(yīng)助: 397 (碩士)
- 貴賓: 0.044
- 金幣: 2118.9
- 散金: 10
- 紅花: 208
- 帖子: 5633
- 在線: 571.6小時
- 蟲號: 1766465
- 注冊: 2012-04-19
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
- 管轄: 生物科學(xué)綜合
|
一、Western Blot實(shí)驗(yàn)條帶沒出現(xiàn)的原因分析及解決辦法 ： 原因分析 解決辦法 1.一抗和二抗失效 1. 更換抗體；選擇現(xiàn)用現(xiàn)配的工作液 2.一抗和二抗不匹配 2. 更換為同種同屬的同亞型的抗體底物 3.發(fā)光液失效 3. 更換新的發(fā)光液 4.抗體染色不充分 4. 增加抗體濃度；延長孵育時間 5.被測樣品中不含有目的蛋白質(zhì)或者目的 蛋白質(zhì)含量太低 5. 設(shè)置陽性對照。確定標(biāo)本中是否含有目的蛋白質(zhì)； 增加樣品 的上樣量。 6. 溶液中有辣根過氧化物酶的抑制劑 6.用透析和超濾除去所用溶液中如疊氮化鈉之類的抑制劑 7.抗體活力降低 7.在抗體活力保存時間內(nèi)使用抗體；工作液現(xiàn)用現(xiàn)配 二、一抗與二抗的專一性識別檢測，就是蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用檢測，方法很多，免疫共沉淀、Pull down、MADLI-MS、能量轉(zhuǎn)移、分子篩層析等。 |
7樓2014-07-12 00:47:02
南湖山下
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 10.5
- 帖子: 5
- 在線: 1.9小時
- 蟲號: 1014130
- 注冊: 2010-05-08
- 性別: MM
- 專業(yè): 醫(yī)學(xué)病理
2樓2011-04-11 13:03:38
314300420
捐助貴賓 (著名寫手)
- BioEPI: 3
- 應(yīng)助: 16 (小學(xué)生)
- 金幣: 2193.1
- 散金: 2458
- 紅花: 17
- 帖子: 1447
- 在線: 511.5小時
- 蟲號: 851254
- 注冊: 2009-09-18
- 性別: GG
- 專業(yè): 抗體工程學(xué)
3樓2011-04-11 14:56:39
314300420
捐助貴賓 (著名寫手)
- BioEPI: 3
- 應(yīng)助: 16 (小學(xué)生)
- 金幣: 2193.1
- 散金: 2458
- 紅花: 17
- 帖子: 1447
- 在線: 511.5小時
- 蟲號: 851254
- 注冊: 2009-09-18
- 性別: GG
- 專業(yè): 抗體工程學(xué)
4樓2011-04-11 15:06:02
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 材料調(diào)劑 +9 | 一樣YWY 2026-04-01 | 9/450 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 理學(xué)07化學(xué) 303求調(diào)劑 +12 | 睿08 2026-03-27 | 12/600 |
|
|
[考研] 0710生物學(xué)求調(diào)劑 +6 | manman511 2026-04-01 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 309求調(diào)劑 +19 | 誰不是少年 2026-03-29 | 19/950 |
|
|
|
[考研] 086000生物與醫(yī)藥 初試274求調(diào)劑 +5 | 小叮當(dāng)來了 2026-03-30 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 301求調(diào)劑 +8 | axibli 2026-04-01 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 一志愿 南京航空航天大學(xué) ，080500材料科學(xué)與工程學(xué)碩 +10 | @taotao 2026-03-31 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑：一志愿：南京大學(xué) 專業(yè)：0705 總分320 ，本科985，四六級已過 +3 | lfy760306 2026-03-31 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿西交大080500材料學(xué)碩349 +6 | jqx1258 2026-03-31 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 286求調(diào)劑 +6 | Faune 2026-03-30 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿中海洋材料357 +4 | 麥恩莉. 2026-03-30 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 286求調(diào)劑 +5 | 丟掉懶惰 2026-03-27 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 085601一志愿西北工業(yè)大學(xué)初試346 +4 | 085601初試346 2026-03-30 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 303求調(diào)劑 +7 | DLkz1314. 2026-03-30 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿南開大學(xué)0710生物學(xué)359求調(diào)劑 +5 | 兔兔兔111223314 2026-03-29 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 085600，材料與化工321分求調(diào)劑 +10 | 大饞小子 2026-03-28 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 本科新能源科學(xué)與工程，一志愿華理能動285求調(diào)劑 +3 | AZMK 2026-03-27 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 265求調(diào)劑11408 +3 | 劉小鹿lu 2026-03-27 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 復(fù)試調(diào)劑，一志愿南農(nóng)083200食品科學(xué)與工程 +5 | XQTJZ 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 321求調(diào)劑 +6 | wasdssaa 2026-03-26 | 6/300 |
|