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【求助】求助:測(cè)定中藥酸水解液中鼠李糖的含量? 已有3人參與
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我用的是waters High-Performance Carbohydrate糖柱測(cè)定中藥酸水解液中鼠李糖的含量,流動(dòng)相為乙腈:水(70:30),第一次做的時(shí)候?qū)φ掌?鼠李糖都呈單峰(雖然峰形較寬, 不好),但到第二次的時(shí)候再測(cè)對(duì)照品時(shí),已呈明顯雙峰(未完全分開(kāi)),對(duì)照品是用純水配制的.另外樣品的也是呈雙峰. 我起初懷疑是鼠李糖對(duì)照品不純(用的是鑒別用的),但為何第一次又不成雙峰呢?懷疑是鼠李糖不穩(wěn)定分解了?但好像鼠李糖在水中應(yīng)該是很穩(wěn)定的吧? 不知道是什么原因?急求各位老師指點(diǎn)一下!!急! |
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至尊木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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檢測(cè)原理:表面活性劑糖脂分子結(jié)構(gòu)中含有五碳糖,在熱濃硫酸的作用下,脫水生成糖醛類化合物,糖醛類化合物與酚類化合物(3,5—二羥基甲苯、苔黑酚)反應(yīng),縮合生成有色物質(zhì),在可見(jiàn)波長(zhǎng)421nm處有最大吸收峰,在標(biāo)準(zhǔn)曲線上確定相應(yīng)的糖脂濃度,以此進(jìn)行生物表面活性劑的定量分析。 方法一、3,5—二羥基甲苯—硫酸法 將培養(yǎng)液離心后,取0.2ml酸化上清液,用1.0ml乙醚抽提三次,合并提取液,蒸發(fā)掉乙醚,加1.0ml0.05mmol/LNaHCO3溶液溶解,加1.8ml質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω=0.19%3,5—二羥基甲苯(溶解在53%SO4中),在80℃加熱30min,然后室溫冷卻15min于421nm處比色定量。 方法二、苔黑酚反應(yīng) 將發(fā)酵液1ml+9ml苔黑酚的硫酸混合液(60%硫酸和1.6%苔黑酚按5:1混合),混合后于80℃恒溫30min,然后冷卻15min,于421nm測(cè)定吸光度。標(biāo)準(zhǔn)品按一定濃度梯度稀釋按上述方法同樣測(cè)定,制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,從而確定糖脂的濃度。 方法三、蒽酮法 將5ml發(fā)酵液+10ml乙酸乙酯混勻,萃取,取溶劑層0.05ml到試管中;用N2流除去干擾蒽酮顯色的溶劑;加入1ml蒸餾水和5ml0.2%蒽酮硫酸溶液(硫酸/水=75%)顯色劑;在沸水中加熱10min,冷卻后在620nm下測(cè)定OD值對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線得到對(duì)應(yīng)的糖脂含量。 方法四 100℃顯色15 min,苯酚用量1.0 mL,硫酸用量5.0 mL,于482nm處測(cè)定.結(jié)果表明,用此方法測(cè)定鼠李糖脂 |
木蟲(chóng) (職業(yè)作家)
金蟲(chóng) (小有名氣)

金蟲(chóng) (小有名氣)
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