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【求助】求助：測定中藥酸水解液中鼠李糖的含量？ 已有3人參與
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我用的是waters High-Performance Carbohydrate糖柱測定中藥酸水解液中鼠李糖的含量,流動相為乙腈:水(70:30),第一次做的時候對照品,鼠李糖都呈單峰(雖然峰形較寬, 不好),但到第二次的時候再測對照品時,已呈明顯雙峰(未完全分開),對照品是用純水配制的.另外樣品的也是呈雙峰. 我起初懷疑是鼠李糖對照品不純(用的是鑒別用的),但為何第一次又不成雙峰呢?懷疑是鼠李糖不穩(wěn)定分解了?但好像鼠李糖在水中應該是很穩(wěn)定的吧? 不知道是什么原因?急求各位老師指點一下!!急! |
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檢測原理：表面活性劑糖脂分子結構中含有五碳糖，在熱濃硫酸的作用下，脫水生成糖醛類化合物，糖醛類化合物與酚類化合物（3，5—二羥基甲苯、苔黑酚）反應，縮合生成有色物質，在可見波長421nm處有最大吸收峰，在標準曲線上確定相應的糖脂濃度，以此進行生物表面活性劑的定量分析。 方法一、3，5—二羥基甲苯—硫酸法 將培養(yǎng)液離心后，取0.2ml酸化上清液，用1.0ml乙醚抽提三次，合并提取液，蒸發(fā)掉乙醚，加1.0ml0.05mmol/LNaHCO3溶液溶解，加1.8ml質量分數ω=0.19%3，5—二羥基甲苯(溶解在53%SO4中)，在80℃加熱30min，然后室溫冷卻15min于421nm處比色定量。 方法二、苔黑酚反應 將發(fā)酵液1ml+9ml苔黑酚的硫酸混合液（60%硫酸和1.6%苔黑酚按5：1混合），混合后于80℃恒溫30min，然后冷卻15min，于421nm測定吸光度。標準品按一定濃度梯度稀釋按上述方法同樣測定，制作標準曲線，從而確定糖脂的濃度。 方法三、蒽酮法 將5ml發(fā)酵液+10ml乙酸乙酯混勻，萃取，取溶劑層0.05ml到試管中；用N2流除去干擾蒽酮顯色的溶劑；加入1ml蒸餾水和5ml0.2%蒽酮硫酸溶液（硫酸/水=75%）顯色劑；在沸水中加熱10min，冷卻后在620nm下測定OD值對照標準曲線得到對應的糖脂含量。 方法四 100℃顯色15 min,苯酚用量1.0 mL,硫酸用量5.0 mL,于482nm處測定.結果表明,用此方法測定鼠李糖脂 |
3樓2009-11-01 18:21:04
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