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dcb005金蟲 (著名寫手)
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[交流]
求雙酶切，分步酶切的具體操作步驟
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| 第一次酶切結束后如何沉淀，在做第二次酶切，第二結束后也是同樣的沉淀么？想找詳細操作步驟！采用了6個金幣奉送，蟲友幫忙！ |
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1514132
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2樓2010-01-08 15:53:15
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dcb005(金幣+3):xx 2010-05-28 23:21:49
dcb005(金幣+1):xx 2010-05-28 23:23:02
dcb005(金幣+1):xx 2010-05-28 23:23:02
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建議樓主這樣做： 在第一次酶切后用膠回收試劑盒或者PCR產(chǎn)物純化試劑盒將你所要的大小一致的片段回收回來，然后對所回收的產(chǎn)物進行第二次酶切，酶切后用同樣的方法姜產(chǎn)物回收回來。建議您用NEB公司的酶，TaKaRa公司的酶有些時候不好使，不穩(wěn)定。 另外，如果有可以共用Buffer的，也可以試一試，我的經(jīng)驗是雙酶切雖然節(jié)省時間，但是經(jīng)常切不開或者酶切的不完全。影響下一步的反應。如果時間允許的話，盡量用分布酶切，這樣雖然時間要長一些，但是可以提高效率，防止實驗材料的浪費。 最后，提醒樓主一點，分步酶切的時候因為每一步都有少許樣品的損失，所以一定要準備充足的樣品。一般是正常樣品量的1.5倍。 |
3樓2010-01-08 17:34:40
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5樓2010-01-08 18:34:37
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