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Yakamoz325銀蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】關(guān)于使用AFLP的方法做遺傳多樣性的研究的幾個(gè)問題 已有9人參與
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大家好，我是分子生物學(xué)菜鳥，以前沒有做過相關(guān)的研究 我現(xiàn)在想做一種植物的遺傳多樣性，大約有10個(gè)樣點(diǎn)，每個(gè)樣點(diǎn)采樣50個(gè)，這樣算來也就是說共有500個(gè)樣，如果用AFLP的方法來做，大約需要多少錢呢？ 此外，是不是有AFLP的試劑盒賣，用試劑盒是不是要比常規(guī)的AFLP方法貴很多呢？ 謝謝大家了。 盼大家指點(diǎn)。 小木蟲上的朋友向來熱情，希望今天的帖子有人回復(fù)��！ 萬分感謝！ |
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Yakamoz325(金幣+10): 2010-04-28 18:21
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AFLP的實(shí)驗(yàn)我們做了4年，可以和你交流下經(jīng)驗(yàn)。如果你是首次做AFLP，實(shí)驗(yàn)室基礎(chǔ)決定你的預(yù)算。 1.儀器 建議用伯樂的產(chǎn)品。我們用的是：伯樂sequencing cell。一套配下來估計(jì)（30萬），其中梳子和墊片很重要。 優(yōu)點(diǎn)是：操作簡(jiǎn)便，特別是灌膠，制膠的過程。 2.相關(guān)試劑 首先玻璃板和托盤。一般準(zhǔn)備100-200個(gè)就夠了，注意規(guī)格。我們的是56×38的（cm）；固定、漂洗、染色、脫色用的托盤要按照你玻璃板的規(guī)格而定，操作方便，不能太小也不能太大，太小，不便操作；太大，搖床的功率是問題。估計(jì)總共（700元） 其次試劑，AFLP所用是試劑很多，要注意的是：尿素的質(zhì)量；其他的藥品Acr&Bis、M剝離硅烷、親和硅烷、溴芬藍(lán)和二甲苯氰FF、TEMED、硼酸、甲醛、冰醋酸、無水碳酸鈉、硫代硫酸鈉、硝酸銀均按照技術(shù)指導(dǎo)就可以用。（1500） 第三PCR，這個(gè)就是根據(jù)你的需要了。我們用的如下：Tris、EDTA、β-巰基乙醇、PVP、CTAB、水飽和酚、MseI、EcoRI、T4 DNA連接酶、MseI adapter、EcoRI adapter、瓊脂糖、Taq聚合酶、dNTP 、 Marker；引物的數(shù)量，一般是16×16組合的。（4000） 以上說的就是從DNA提取到、酶切、連接、PCR、銀染整個(gè)過程用的藥品和具體的花費(fèi)。如果實(shí)驗(yàn)室有的話能節(jié)約很多，如果沒有就要買了。 建議：用一次的試劑就“借”；消耗品都是些化學(xué)試劑，便宜；DD水的質(zhì)量和數(shù)量不可小看。 3實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 不知道LZ 是做什么的，我們做的是資源方面的所以工作量很大，引物數(shù)和樣品數(shù)決定決定你的預(yù)算。500個(gè)樣，一個(gè)引物組合理想的話要跑（不同規(guī)格47、73、96）8板。我們一般一人一天4個(gè)板，人力成本就少，如果你一個(gè)人做，會(huì)高。 可以這樣說，AFLP一板的成本（含人工）80左右（前提是實(shí)驗(yàn)室基礎(chǔ)好），實(shí)驗(yàn)過程長比較辛苦。 經(jīng)驗(yàn)交流，拍磚勿狠。 |
9樓2010-04-28 10:44:23
Yakamoz325
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2樓2010-04-27 09:38:53
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3樓2010-04-27 11:13:16
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4樓2010-04-27 19:54:44
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