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Yakamoz325銀蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】關(guān)于使用AFLP的方法做遺傳多樣性的研究的幾個問題 已有9人參與
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Yakamoz325
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2樓2010-04-27 09:38:53
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4樓2010-04-27 19:54:44
Yakamoz325
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5樓2010-04-27 21:17:06
Yakamoz325
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6樓2010-04-27 21:17:24
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7樓2010-04-28 08:56:46
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8樓2010-04-28 10:32:36
Yakamoz325(金幣+10): 2010-04-28 18:21
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AFLP的實驗我們做了4年，可以和你交流下經(jīng)驗。如果你是首次做AFLP，實驗室基礎(chǔ)決定你的預(yù)算。 1.儀器 建議用伯樂的產(chǎn)品。我們用的是：伯樂sequencing cell。一套配下來估計（30萬），其中梳子和墊片很重要。 優(yōu)點是：操作簡便，特別是灌膠，制膠的過程。 2.相關(guān)試劑 首先玻璃板和托盤。一般準(zhǔn)備100-200個就夠了，注意規(guī)格。我們的是56×38的（cm）；固定、漂洗、染色、脫色用的托盤要按照你玻璃板的規(guī)格而定，操作方便，不能太小也不能太大，太小，不便操作；太大，搖床的功率是問題。估計總共（700元） 其次試劑，AFLP所用是試劑很多，要注意的是：尿素的質(zhì)量；其他的藥品Acr&Bis、M剝離硅烷、親和硅烷、溴芬藍和二甲苯氰FF、TEMED、硼酸、甲醛、冰醋酸、無水碳酸鈉、硫代硫酸鈉、硝酸銀均按照技術(shù)指導(dǎo)就可以用。（1500） 第三PCR，這個就是根據(jù)你的需要了。我們用的如下：Tris、EDTA、β-巰基乙醇、PVP、CTAB、水飽和酚、MseI、EcoRI、T4 DNA連接酶、MseI adapter、EcoRI adapter、瓊脂糖、Taq聚合酶、dNTP 、 Marker；引物的數(shù)量，一般是16×16組合的。（4000） 以上說的就是從DNA提取到、酶切、連接、PCR、銀染整個過程用的藥品和具體的花費。如果實驗室有的話能節(jié)約很多，如果沒有就要買了。 建議：用一次的試劑就“借”；消耗品都是些化學(xué)試劑，便宜；DD水的質(zhì)量和數(shù)量不可小看。 3實驗設(shè)計 不知道LZ 是做什么的，我們做的是資源方面的所以工作量很大，引物數(shù)和樣品數(shù)決定決定你的預(yù)算。500個樣，一個引物組合理想的話要跑（不同規(guī)格47、73、96）8板。我們一般一人一天4個板，人力成本就少，如果你一個人做，會高。 可以這樣說，AFLP一板的成本（含人工）80左右（前提是實驗室基礎(chǔ)好），實驗過程長比較辛苦。 經(jīng)驗交流，拍磚勿狠。 |
9樓2010-04-28 10:44:23
liyong1981
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10樓2010-04-28 10:47:45
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