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[交流]
【求助/交流】大量金幣感謝，基因克隆表達。 已有12人參與
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我想在E.coli中表達一個外源基因，并且要這個基因表達出來具有酶活性，能夠轉(zhuǎn)化底物，合成新的產(chǎn)物。但是有一點不明白的就是：在克隆外源基因的時候，從ATG開始，到TAA結(jié)束？還是從更上游的位置開始到更下游的位置結(jié)束？這兩者之間有什么區(qū)別呢？ 第二個問題：如果在同一載體上克隆表達兩個基因，這兩個基因如何連接呢？是第一個基因的TAA直接續(xù)接第二個基因的ATG？還是中間需要添加一些片段？ 各位大俠�。何沂窃谧x的碩士研究生，要開展分子生物學的課題。由于導師在這方面不太精通，因此求助一個問題。 [ Last edited by zhmy26 on 2010-5-12 at 08:28 ] |
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9樓2010-05-11 08:41:33
追逐夢想
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2樓2010-05-05 08:44:45
snoopyzxx
木蟲 (著名寫手)
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★ ★ ★ ★
zhmy26(金幣+2): 2010-05-05 13:54:51
scelab(金幣+4):熱心蟲友，歡迎多來交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-05-05 15:33:31
zhmy26(金幣+2): 2010-05-05 13:54:51
scelab(金幣+4):熱心蟲友，歡迎多來交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-05-05 15:33:31
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有很多載體可以選擇，比如pet系列的。看你的要求，你可以使用非融合表達，即表達時不帶標簽，可以表達出天然的目的蛋白。一般表達載體都是載體具有啟動子的，不需要自行添加，你只需將目的基因插入相應的酶切位點就可以了，至于終止，你可以使用載體上的終止子，你也可以在設(shè)計引物時自己加上雙終止子TGATAA，我們一般都是自己加雙終止子。表達的時候，載體是從啟動子之后的第一個ATG開始表達，直到終止密碼子。 第二個問題，現(xiàn)在有很多雙表達系統(tǒng)可以選擇，這種系統(tǒng)具有多個啟動子，可以插入多個目的基因，這種系統(tǒng)表達出來的每個蛋白是獨立分開的。而樓上介紹的SOE拼接表達出來的兩個蛋白一般是連在一起的。 |
3樓2010-05-05 09:34:30
fungixx
至尊木蟲 (文壇精英)
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4樓2010-05-05 09:40:27
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