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天使托專家顧問 (職業(yè)作家)
T.Shen
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[交流]
【求助/交流】(5.20更新)PCR產(chǎn)物電泳沒有條帶,why? 已有10人參與
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今天偶做了一個pcr,目的片段1800多bp,退火溫度63,延伸2Min,不料做完之后電泳沒有條帶!不知道是何原因? ps:100微升體系,10 buffer 5 DMSO 75 ddH2O dNTP 引物 模板 酶 都是2 沒有加氯化鉀,因為近來實驗室都說加了氯化鉀做不出來! 請高手幫忙分析原因? 還有我明天想做一個梯度,不知道設(shè)幾個梯度好?還有如果做梯度的話,每一管做多少微升合適? 謝謝高手了! 5.20更新今天中午又去做了一個pcr,這次我做的是10微升體系的,分別用兩種酶(鼎國的和pfu酶)各做了五個梯度,54 56 58 60 62度,結(jié)果下午去跑電泳還是沒有任何條帶,我考慮到是不是引物沒有稀釋均勻的問題,隨后又對我的引物進行了電泳,點了5微升,有條帶很亮! 目前已經(jīng)可以排除引物的問題(因為我引物設(shè)計完成后讓師姐都檢查了一下,而且今天也排除了引物稀釋均勻的問題); 現(xiàn)在我也不知道到底是什么問題了?大家有什么更好的建議沒有? 有哪位仁兄用過pcr增強劑? [ Last edited by 天使托 on 2010-5-20 at 18:45 ] |

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