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死掉的洋蔥新蟲 (初入文壇)
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[交流]
【求助/交流】葡萄糖氧化酶酶活的測定方法 已有10人參與
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| 我是第一次發(fā)帖，也沒有金幣可以貢獻(xiàn)，不過希望大家?guī)蛶兔Γ矣玫氖欠止夤舛扔?jì)來測定葡萄糖氧化酶的酶活，可是每次測定的值和實(shí)際值相差很多，大家看看還有沒有其他的方法可以測定葡萄糖氧化酶的酶活！謝謝各位大俠了！ |
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2樓2010-05-26 11:09:13
3樓2010-05-26 15:45:27
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4樓2010-05-26 15:49:51
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5樓2010-05-26 15:56:47
6樓2010-05-26 16:31:31
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我使用的檢驗(yàn)原理是： 葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化生成D-吡喃葡萄糖酸-1,5-內(nèi)酯以及過氧化氫。就是利用反應(yīng)生成的過氧化氫將還原性染料（鄰聯(lián)茴香氨）轉(zhuǎn)化為氧化性染料，反應(yīng)條件是25攝氏度，pH為7.0。 檢測方法是： 將配置好的底物溶液（0.066mg/mL的鄰聯(lián)茴香氨溶液、10%葡萄糖溶液、過氧化氫溶液）放在25攝氏度水浴鍋中平衡5分鐘，然后加入稀釋至0、2U/mL的葡萄糖氧化酶溶液，放入分光光度計(jì)中436nm下記錄5min內(nèi)吸光度值的鄭家，根據(jù)線性曲線計(jì)算每分鐘吸光度值的變化量（△E），根據(jù)公式：Volume activity（U/mL）=△E*3.72*稀釋因子計(jì)算酶活 購買過來的葡萄糖氧化酶瓶身上有標(biāo)記的酶活，然后我們將測得的酶活和標(biāo)記的酶活做對比，計(jì)算百分比，但是每次我測得的百分比都要沒有達(dá)到100%正負(fù)10%范圍內(nèi)，那說明我的酶活測定肯定有問題，酶蛋白是不需要測定的。 |
7樓2010-05-27 10:35:04
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8樓2010-05-28 11:26:39
★ ★ ★ ★
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
lstt09nk(金幣+3):很好的經(jīng)驗(yàn)~~ 2010-05-29 21:27:13
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
lstt09nk(金幣+3):很好的經(jīng)驗(yàn)~~ 2010-05-29 21:27:13
| 我只能給出大概的建議，不保證一定正確啊。測定酶活性應(yīng)該在底物過量的前提下，測定初始酶活，對嗎？看到你所給出的體系中，有標(biāo)準(zhǔn)的0.2U/mL的葡萄糖氧化酶溶液，能否這樣做？將這個0、2U/mL的葡萄糖氧化酶溶液再稀釋2、4、8倍，根據(jù)你的方法獲得分別稀釋0、2、4、8倍的酶活單位，然后將這四個數(shù)字進(jìn)行線性擬合。如果這四個數(shù)值擬合R2值在95%以上，你就可以大概認(rèn)為這是一條標(biāo)準(zhǔn)曲線。然后按照你所說的偏差值進(jìn)行一次換算即可，不必非要考慮酶活是否有問題了。不知道我講清楚了沒有？祝你好運(yùn)。 |
9樓2010-05-29 20:07:34
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10樓2010-06-01 10:27:55
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