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維納斯的騎士金蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】請(qǐng)教N(yùn)EB的pmeI的酶切體系 已有4人參與
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| 同上，請(qǐng)教N(yùn)EB的pmeI的酶切體系，最近在做一個(gè)克隆，用pmeI和EcoRI酶切，這兩個(gè)酶沒有共同的buffer，只能單個(gè)切，中間用純化的方法和乙醇沉淀的方法都試過了，但是一直沒挑到正確的轉(zhuǎn)化子，只有一些空載質(zhì)粒，大家能不能給些建議啊，謝謝！ |
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susizheng
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2樓2010-06-02 08:55:10
維納斯的騎士
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4樓2010-06-02 16:45:45
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5樓2010-06-02 16:48:10
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6樓2010-06-02 17:38:22
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小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
lstt09nk(金幣+3):歡迎交流~~ 2010-06-02 18:38:18
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回收效率問題倒不是很大，初始樣品多加一點(diǎn)（質(zhì)粒比較好辦，PCR產(chǎn)物的話牽扯到PCR效率和產(chǎn)物回收的問題，可能樣品量受限制，最好能連T載體轉(zhuǎn)化提質(zhì)粒之后再切），最后回收完跑電泳只要能看見就行 酶切位點(diǎn)距離的話要看有多近了，相差幾十bp的話，控制一下電泳條件還有希望看見，100bp以上基本沒什么問題。如果是相鄰的位點(diǎn)，相差幾bp的話，同步雙酶切可能切不開，離得不能太近。這種情況還是推薦分步酶切 |
7樓2010-06-02 18:00:00
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8樓2010-06-02 18:07:22
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