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維納斯的騎士金蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】請教NEB的pmeI的酶切體系 已有4人參與
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| 同上,請教NEB的pmeI的酶切體系,最近在做一個克隆,用pmeI和EcoRI酶切,這兩個酶沒有共同的buffer,只能單個切,中間用純化的方法和乙醇沉淀的方法都試過了,但是一直沒挑到正確的轉(zhuǎn)化子,只有一些空載質(zhì)粒,大家能不能給些建議啊,謝謝! |
木蟲 (著名寫手)
我們是糖 甜到憂傷

金蟲 (小有名氣)
金蟲 (正式寫手)
木蟲 (正式寫手)
金蟲 (小有名氣)
木蟲 (正式寫手)
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回收效率問題倒不是很大,初始樣品多加一點(質(zhì)粒比較好辦,PCR產(chǎn)物的話牽扯到PCR效率和產(chǎn)物回收的問題,可能樣品量受限制,最好能連T載體轉(zhuǎn)化提質(zhì)粒之后再切),最后回收完跑電泳只要能看見就行 酶切位點距離的話要看有多近了,相差幾十bp的話,控制一下電泳條件還有希望看見,100bp以上基本沒什么問題。如果是相鄰的位點,相差幾bp的話,同步雙酶切可能切不開,離得不能太近。這種情況還是推薦分步酶切 |
金蟲 (小有名氣)
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