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yanhong2029
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[交流]
【求助/交流】枯草中表達(dá)外源基因，有蛋白，但是沒(méi)有酶活，是什么原因？ 已有3人參與
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來(lái)源于大腸桿菌一種變形菌（革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌）的外源目的基因，將其克隆至大腸桿菌中表達(dá)，能夠表達(dá)出活性。 然后將其克隆至枯草芽孢桿菌中表達(dá)，采用的是枯草編碼30S核糖蛋白rpsD基因的啟動(dòng)子，該啟動(dòng)子是一組成型強(qiáng)啟動(dòng)子。該表達(dá)出來(lái)的蛋白酶，在作用于底物時(shí)需要還原型輔酶I：NADH。 SDS-PAGE顯示有蛋白，但是測(cè)定酶活性時(shí)一直沒(méi)有結(jié)果？ 十分苦惱，未知是什么原因？ 是形成包涵體呢？ 還是該蛋白在該宿主中雖然表達(dá)，但是表達(dá)出來(lái)的就是沒(méi)有活性的蛋白？ 還是輔酶的原因？ 需要如何確定？ 還請(qǐng)各位朋友能夠幫忙解決！ 著急畢業(yè)呢！ 先謝謝各位了！ |
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