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[交流]
【求助/交流】表達(dá)載體構(gòu)建不成功的原因 已有15人參與
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| 目前在構(gòu)建一個表達(dá)載體，經(jīng)同樣雙酶切的目的基因和PPICZA已經(jīng)獲得，且表達(dá)載體是從以前構(gòu)建好的載體中酶切下來的，所以不存在沒切開的問題�，F(xiàn)在將目的基因跟PPICZA連接，用了T4 連接酶和Solution1分別連接過，都能長菌，但沒有要的陽性克隆，每次轉(zhuǎn)化后搖24小時才能長出來，且可以長很多菌，但單菌落很小。感受態(tài)是沒有問題的，實(shí)在不知道問題出在哪里，已經(jīng)重復(fù)很多次了，都得不到成功的轉(zhuǎn)化子。（以前成功將該目的基因與PPICZA連接過，但目的基因未去除信號肽）望大家來分享一下你們的寶貴經(jīng)驗(yàn)！ |
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3樓2010-06-08 20:54:54
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10樓2010-06-09 10:25:09
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