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[交流]
【求助/交流】關(guān)于電轉(zhuǎn)酵母X33的問(wèn)題 已有7人參與
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| 我的表達(dá)載體是用的PPICZa，現(xiàn)在電轉(zhuǎn)酵母X33感受態(tài)細(xì)胞，電壓2000v,通電時(shí)間3~5ms,但是電轉(zhuǎn)了很多次都得不到陽(yáng)性轉(zhuǎn)化子。電轉(zhuǎn)的結(jié)果要么是不長(zhǎng)菌，要么是正常時(shí)間里（隔一天長(zhǎng)菌）長(zhǎng)菌，但是菌落PCR檢測(cè)全為陰性，不知道還有什么因素會(huì)影響電轉(zhuǎn)效率？？（基本可以確定我的感受態(tài)效果較好，線性化的產(chǎn)物濃度也很大，每80ul感受態(tài)加入10ul線性化產(chǎn)物） |
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旋木晴晴 
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小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
看天(金幣+2):鼓勵(lì)分享 2010-07-07 18:01:50
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看天(金幣+2):鼓勵(lì)分享 2010-07-07 18:01:50
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酵母菌落PCR相對(duì)細(xì)菌比較難一點(diǎn)，樓主P不出也可能是PCR本身的問(wèn)題。其實(shí)已經(jīng)轉(zhuǎn)成功了。建議菌落PCR時(shí)用LITCASE（沒(méi)有可以用溶菌酶替代）37°處理一小時(shí)再反復(fù)凍容作為模板。我感覺(jué)只要長(zhǎng)出來(lái)90%都時(shí)陽(yáng)性克隆，以前我是直接培養(yǎng)看有酶活沒(méi)有，結(jié)果都有。好運(yùn)。 |
8樓2010-07-07 17:20:10
silicare
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2樓2010-07-06 18:20:38
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3樓2010-07-06 19:46:23
旋木晴晴
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4樓2010-07-06 20:40:08
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