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zzq770204至尊木蟲 (著名寫手)
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[交流]
【求助/交流】求助：那種方法提取RNA濃度比較高？ 已有13人參與
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本人擬構(gòu)建個均一化cDNA文庫，需要的RNA量比較多，因此需要比較高的濃度。采用安比奧的試劑盒提取出的RNA濃度太低了，在逆轉(zhuǎn)錄和擴(kuò)增時間的PCR次數(shù)太多了，難以滿足要求。但是看別人用TRzol抽提由于時間長，很容易降解。請問哪種方法或試劑盒比較好？麻煩指點(diǎn)下，謝謝！ [ Last edited by zzq770204 on 2010-7-29 at 21:18 ] |
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zzq770204(金幣+10):你是試劑公司還是？ 2010-07-24 20:17:18
zzq770204(金幣+10): 2010-07-30 12:54:51
lstt09nk(金幣+2):鼓勵交流~~ 2010-08-02 17:18:22
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首先不明白你擴(kuò)增目的基因后為什么要純化？擴(kuò)完了可以直接電泳。 如果反轉(zhuǎn)錄可以擴(kuò)增ACTIN，說明模板質(zhì)量還行，但是沒看到你的RNA，也不知道你的材料來源，因此無法確定能否滿足建庫的要求。 我給你幾個建議，如果你的CDNA模板量足夠大，可以選擇1-2lu跑個電泳看看。如果看到清晰彌散條帶，那就是擴(kuò)增環(huán)節(jié)的問題，跟你的模板無關(guān)了。 試試看用其他模板是否可以擴(kuò)增？修改一下你的PCR條件，特別是退火溫度。 找公司做文庫，犯不上，現(xiàn)在這個已經(jīng)很普及了，如果實(shí)驗(yàn)室有錢可以選擇，畢竟省事，我們這邊5K-2w不等，看你要多大的文庫了。 |
7樓2010-07-24 15:37:38
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8樓2010-07-25 20:52:30
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reasonspare(金幣+2):你的誠懇的帖子，值得我誠懇的加分。 2010-07-31 05:12:39
zzq770204(金幣+10): 2010-07-31 22:48:04
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zzq770204(金幣+10): 2010-07-31 22:48:04
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呵呵，先謝謝你的金幣，這個帖子，無需金幣，我也可以回答你。對于提大量RNA,目前已知的就是TRIZOL了，這個方法用的最廣，最經(jīng)典，至于你說的時間長降解，只要你按步驟完成，降解一點(diǎn)沒關(guān)系的。你是要抽提什么材料的RNA？不同材料，提取差異化很大，有些組織容易提，有些植物的就很難提，包括材料的復(fù)雜程度，是否多糖，多沉淀，等等，都是考慮的因素。但是總體而言，TRIZOL是最好的方法了�？墒嵌嘣噹状�，掌握方法就可以。不難的 |
9樓2010-07-31 02:50:01
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