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feiye2214木蟲(chóng) (正式寫手)
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[交流]
【求助/交流】PCR遇挫！求解決之道！ 已有9人參與
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小弟想擴(kuò)增一段已知序列， 5’tttgatgaaaatcgctt......aggcct...tcaaaaacact......tctcttttacagttcagcc3’.....1609bp 3’agaaaatgtcaagtcgg5’ 現(xiàn)在我就把上下游的17個(gè)序列作為引物序列，并加上限制酶切位點(diǎn)序列設(shè)計(jì)引物為： Pf：5’GGCGAATTCGtttgatgaaaatcgctt3’ Pr：5’ ATTGGATCCggctgaactgtaaaaga3’ 去擴(kuò)增該序列時(shí)，跑膠看到四條明顯的條帶，1000-1500bp有兩條，750bp之下還有兩條，我要的片段是1609bp的，我該如何獲得目的片段？ 是否把每條帶都切下來(lái)送去測(cè)序哦？ 還是調(diào)整引物和PCR條件再次實(shí)驗(yàn)？能不能在再延長(zhǎng)引物序列以增加特異性，本來(lái)有27個(gè)了，聽(tīng)說(shuō)最長(zhǎng)可以達(dá)到35bp？是否可行？ 時(shí)間緊迫，跪求答案！ 這段片段是想做克隆的。 [ Last edited by feiye2214 on 2010-7-23 at 17:59 ] |
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xp198766
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2樓2010-07-23 16:28:30
zhaohq1209
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3樓2010-07-23 17:40:17
feiye2214
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4樓2010-07-23 17:51:57
xp198766
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5樓2010-07-23 18:18:32
feiye2214
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6樓2010-07-23 19:35:49
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7樓2010-07-23 19:45:25
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8樓2010-07-23 19:51:34
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