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feiye2214木蟲 (正式寫手)
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[交流]
【求助/交流】PCR遇挫！求解決之道！ 已有9人參與
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小弟想擴增一段已知序列， 5’tttgatgaaaatcgctt......aggcct...tcaaaaacact......tctcttttacagttcagcc3’.....1609bp 3’agaaaatgtcaagtcgg5’ 現(xiàn)在我就把上下游的17個序列作為引物序列，并加上限制酶切位點序列設(shè)計引物為： Pf：5’GGCGAATTCGtttgatgaaaatcgctt3’ Pr：5’ ATTGGATCCggctgaactgtaaaaga3’ 去擴增該序列時，跑膠看到四條明顯的條帶，1000-1500bp有兩條，750bp之下還有兩條，我要的片段是1609bp的，我該如何獲得目的片段？ 是否把每條帶都切下來送去測序哦？ 還是調(diào)整引物和PCR條件再次實驗？能不能在再延長引物序列以增加特異性，本來有27個了，聽說最長可以達到35bp？是否可行？ 時間緊迫，跪求答案！ 這段片段是想做克隆的。 [ Last edited by feiye2214 on 2010-7-23 at 17:59 ] |
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