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feiye2214木蟲 (正式寫手)
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[交流]
【求助/交流】PCR遇挫!求解決之道! 已有9人參與
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小弟想擴增一段已知序列, 5’tttgatgaaaatcgctt......aggcct...tcaaaaacact......tctcttttacagttcagcc3’.....1609bp 3’agaaaatgtcaagtcgg5’ 現(xiàn)在我就把上下游的17個序列作為引物序列,并加上限制酶切位點序列設(shè)計引物為: Pf:5’GGCGAATTCGtttgatgaaaatcgctt3’ Pr:5’ ATTGGATCCggctgaactgtaaaaga3’ 去擴增該序列時,跑膠看到四條明顯的條帶,1000-1500bp有兩條,750bp之下還有兩條,我要的片段是1609bp的,我該如何獲得目的片段? 是否把每條帶都切下來送去測序哦? 還是調(diào)整引物和PCR條件再次實驗?能不能在再延長引物序列以增加特異性,本來有27個了,聽說最長可以達到35bp?是否可行? 時間緊迫,跪求答案! 這段片段是想做克隆的。 [ Last edited by feiye2214 on 2010-7-23 at 17:59 ] |
鐵桿木蟲 (著名寫手)
小木蟲職業(yè)打醬油滴~~!
鐵桿木蟲 (著名寫手)

木蟲 (正式寫手)
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