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【求助】求助：HPLC定量,得出無法解釋的結果？ 已有2人參與
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第一次用HPLC定量,得出無法解釋的結果,請各位大俠幫忙. 用A物質標準品(固體粉末),ddw制成0.5mg/ml溶液，分別進樣5ul，10ul，15ul，20ul，25ul，30ul，50ul進行 HPLC，根據標準品HPLC檢測時的峰高，制得峰高與進樣量關系的標準曲線y=31.286x+609.64(R2=0.98)。 將待測樣品X（固體粉末），ddw制成0.5mg/ml溶液，進樣10ul（質量為5ug），HPLC檢測，A物質的峰高為1280.1，根據標準曲線的計算得HPCL檢測的10ul X樣品中A物質的含量為32ug,可是X物質進行HPLC檢測時，進樣總質量不過5ug,A物質在其中的含量怎么可能為32ug（〉5ug）呢？ 目前，我能夠想到的原因： 1，樣品配置的時候出現了問題： 但是，A和X物質同時進行稱量、配制，都是取20mg樣品，溶于200ul ddw，配成100mg/ml母液，然后取5ul母液ddw稀釋至1ml,配成0.5mg/ml的檢測溶液。如果配制過程有問題，那么兩種物質的溶液濃度就會都有問題，不會兩者之間有這么大的差異。 2，X樣品在A吸收峰的地方，還有另外一種物質的吸收峰： 但是，HPLC的條件（流動相中有機相和無機相的配比）做過多次改動，X物質中A物質出峰時間與A物質標準品的出峰時間總是一致的，沒有看見X物質的A峰周圍有其它峰出現；并且，X物質的A峰，很犀利，不像夾雜有其它物質。 不知道還有什么問題，我忽略掉了，沒有注意，請各位大俠指點。 本試驗也用峰面積作過標曲，R2=0.95；而用峰高作標曲時，R2=0.98,線性更好一些。所以后來的試驗用的是有關峰高的標準曲線。 另外，即使用峰面積的標曲計算，還是得到同樣的結果。 請各位大俠指教。 根據峰高，而做的標準曲線  標準品的HPLC峰圖  待測樣品X的HPLC峰圖  |
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4樓2010-08-12 14:35:40
2樓2010-08-12 11:00:10
3樓2010-08-12 13:58:04
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