 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2477 | 回復(fù): 10 | |||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
[交流]
【求助/交流】關(guān)于反向PCR 和測序結(jié)果的拼接 已有6人參與
|
|||
|
最近在做反向PCR·· 用的HaeIII酶切·· 彌散性條帶 回收800-2000bp 的片段，純化，用2ng/ul 的量進(jìn)行自環(huán)化。。但是之后的反向PCR 除了第一次跑出來一個，后面一直跑不出啊。。。 我想問··· 如果反向PCR 的結(jié)果依然是彌散帶，是不是可以反復(fù)調(diào)整下體系繼續(xù)做呢？ 還是如果跑不出來就需要重新進(jìn)行自環(huán)化？ 不知道大家反向的PCR 的成功率一般高么？ 有什么好的經(jīng)驗(yàn)么？ 還有就是 反向PCR 測序的結(jié)果出來以后，應(yīng)該如何拼接呢？ 如何找到片段的連接點(diǎn)？ 求高人賜教·· 不甚感激！ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有224人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 求助：PCR擴(kuò)增片段測序結(jié)果引物中間多出150bp的片段
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 為什么PCR條帶在1500的樣子， 測序結(jié)果才1057bp
已經(jīng)有16人回復(fù)
- PCR產(chǎn)物經(jīng)酶切電泳后所得的基因型與測序結(jié)果不一致，是何原因？該如何處理？
已經(jīng)有10人回復(fù)
- PCR產(chǎn)物測序結(jié)果
已經(jīng)有8人回復(fù)
- pcr產(chǎn)物測序和克隆之后重組質(zhì)粒測序結(jié)果一樣嗎？
已經(jīng)有12人回復(fù)
- PCR產(chǎn)物直接測序存在結(jié)合問題！��！
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 用pMD-18T simple 雙向測序，PCR驗(yàn)證有條帶，結(jié)果卻是空質(zhì)粒
已經(jīng)有2人回復(fù)
- 【求助/交流】如何對PCR測序產(chǎn)物進(jìn)行分析？
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 【求助/交流】核基因 PCR產(chǎn)物直接測序，結(jié)果出現(xiàn)單個位點(diǎn)套峰，是否需要做克隆測序
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 【求助/交流】PCR產(chǎn)物直接測序，不出峰，啥原因？
已經(jīng)有11人回復(fù)
linxi8579
銅蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 3983.2
- 散金: 87
- 帖子: 473
- 在線: 51.8小時
- 蟲號: 620942
- 注冊: 2008-10-09
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
3樓2010-08-14 15:43:36
ben1147
木蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 1
- 應(yīng)助: 18 (小學(xué)生)
- 貴賓: 0.003
- 金幣: 5847.6
- 紅花: 6
- 帖子: 952
- 在線: 116.9小時
- 蟲號: 709538
- 注冊: 2009-02-26
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
★ ★ ★
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
lstt09nk(金幣+2):鼓勵交流~~ 2010-08-14 15:44:08
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
lstt09nk(金幣+2):鼓勵交流~~ 2010-08-14 15:44:08
|
反向PCR只用一種酶不行啊 要是恰好相鄰兩個Hae III切點(diǎn)之間的片段太長，自連以后的片段長度就超出Taq的擴(kuò)增能力了，肯定P不出來?xiàng)l帶、彌散或者是非特異擴(kuò)增 多用幾種酶吧，至少五種以上 酶切充分一點(diǎn)，不用回收，產(chǎn)物直接純化后稀釋做連接 測序結(jié)果里面肯定有一個相應(yīng)切點(diǎn)的，切點(diǎn)兩邊序列分別做反向互補(bǔ)，就分別是已知片段上、下游的序列 [ Last edited by ben1147 on 2010-8-14 at 14:04 ] |
2樓2010-08-14 14:03:01
4樓2010-08-14 20:16:44
5樓2010-08-14 20:19:02
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 312求調(diào)劑 +7 | 陌宸希 2026-03-16 | 8/400 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 280求調(diào)劑 +3 | 咕嚕曉曉 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
[考博] 環(huán)境領(lǐng)域全國重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室招收博士1-2名 +3 | QGZDSYS 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿天津大學(xué)化學(xué)工藝專業(yè)（081702）315分求調(diào)劑 +7 | yangfz 2026-03-17 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料與化工求調(diào)劑 +6 | 為學(xué)666 2026-03-16 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 【0856】化學(xué)工程（085602）313 分，本科學(xué)科評估A類院�；瘜W(xué)工程與工藝，誠求調(diào)劑 +7 | 小劉快快上岸 2026-03-11 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工 +4 | 安全上岸！ 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 286求調(diào)劑 +3 | lemonzzn 2026-03-16 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +5 | 素年祭語 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 321求調(diào)劑 +5 | 大米飯！ 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 070303一志愿西北大學(xué)學(xué)碩310找調(diào)劑 +5 | d如愿上岸 2026-03-12 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 327求調(diào)劑 +6 | 拾光任染 2026-03-15 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 294求調(diào)劑 +3 | Zys010410@ 2026-03-13 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 330求調(diào)劑 +3 | ?醬給調(diào)劑跪了 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] ［0860］321分求調(diào)劑，ab區(qū)皆可 +4 | 寶貴熱 2026-03-13 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 329求調(diào)劑 +3 | miaodesi 2026-03-12 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求b區(qū)學(xué)校調(diào)劑 +3 | 周56 2026-03-11 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 310求調(diào)劑 +3 | 【上上簽】 2026-03-11 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 工科278分求調(diào)劑 +5 | 周慢熱啊 2026-03-12 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 314求調(diào)劑 +7 | 無懈可擊的巨人 2026-03-12 | 7/350 |
|