 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 2470 | 回復(fù): 10 | |||
[交流]
【求助/交流】關(guān)于反向PCR 和測(cè)序結(jié)果的拼接 已有6人參與
|
|||
|
最近在做反向PCR·· 用的HaeIII酶切·· 彌散性條帶 回收800-2000bp 的片段，純化，用2ng/ul 的量進(jìn)行自環(huán)化。。但是之后的反向PCR 除了第一次跑出來一個(gè)，后面一直跑不出啊。。。 我想問··· 如果反向PCR 的結(jié)果依然是彌散帶，是不是可以反復(fù)調(diào)整下體系繼續(xù)做呢？ 還是如果跑不出來就需要重新進(jìn)行自環(huán)化？ 不知道大家反向的PCR 的成功率一般高么？ 有什么好的經(jīng)驗(yàn)么？ 還有就是 反向PCR 測(cè)序的結(jié)果出來以后，應(yīng)該如何拼接呢？ 如何找到片段的連接點(diǎn)？ 求高人賜教·· 不甚感激！ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有286人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 求助：PCR擴(kuò)增片段測(cè)序結(jié)果引物中間多出150bp的片段
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 為什么PCR條帶在1500的樣子， 測(cè)序結(jié)果才1057bp
已經(jīng)有16人回復(fù)
- PCR產(chǎn)物經(jīng)酶切電泳后所得的基因型與測(cè)序結(jié)果不一致，是何原因？該如何處理？
已經(jīng)有10人回復(fù)
- PCR產(chǎn)物測(cè)序結(jié)果
已經(jīng)有8人回復(fù)
- pcr產(chǎn)物測(cè)序和克隆之后重組質(zhì)粒測(cè)序結(jié)果一樣嗎？
已經(jīng)有12人回復(fù)
- PCR產(chǎn)物直接測(cè)序存在結(jié)合問題�。�！
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 用pMD-18T simple 雙向測(cè)序，PCR驗(yàn)證有條帶，結(jié)果卻是空質(zhì)粒
已經(jīng)有2人回復(fù)
- 【求助/交流】如何對(duì)PCR測(cè)序產(chǎn)物進(jìn)行分析？
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 【求助/交流】核基因 PCR產(chǎn)物直接測(cè)序，結(jié)果出現(xiàn)單個(gè)位點(diǎn)套峰，是否需要做克隆測(cè)序
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 【求助/交流】PCR產(chǎn)物直接測(cè)序，不出峰，啥原因？
已經(jīng)有11人回復(fù)
ben1147
木蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 1
- 應(yīng)助: 18 (小學(xué)生)
- 貴賓: 0.003
- 金幣: 5847.6
- 紅花: 6
- 帖子: 952
- 在線: 116.9小時(shí)
- 蟲號(hào): 709538
- 注冊(cè): 2009-02-26
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
★ ★ ★
小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
lstt09nk(金幣+2):鼓勵(lì)交流~~ 2010-08-14 15:44:08
小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
lstt09nk(金幣+2):鼓勵(lì)交流~~ 2010-08-14 15:44:08
|
反向PCR只用一種酶不行啊 要是恰好相鄰兩個(gè)Hae III切點(diǎn)之間的片段太長(zhǎng)，自連以后的片段長(zhǎng)度就超出Taq的擴(kuò)增能力了，肯定P不出來?xiàng)l帶、彌散或者是非特異擴(kuò)增 多用幾種酶吧，至少五種以上 酶切充分一點(diǎn)，不用回收，產(chǎn)物直接純化后稀釋做連接 測(cè)序結(jié)果里面肯定有一個(gè)相應(yīng)切點(diǎn)的，切點(diǎn)兩邊序列分別做反向互補(bǔ)，就分別是已知片段上、下游的序列 [ Last edited by ben1147 on 2010-8-14 at 14:04 ] |
2樓2010-08-14 14:03:01
4樓2010-08-14 20:16:44
ben1147
木蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 1
- 應(yīng)助: 18 (小學(xué)生)
- 貴賓: 0.003
- 金幣: 5847.6
- 紅花: 6
- 帖子: 952
- 在線: 116.9小時(shí)
- 蟲號(hào): 709538
- 注冊(cè): 2009-02-26
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
6樓2010-08-14 22:06:05
linxi8579
銅蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 3983.2
- 散金: 87
- 帖子: 473
- 在線: 51.8小時(shí)
- 蟲號(hào): 620942
- 注冊(cè): 2008-10-09
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
3樓2010-08-14 15:43:36
5樓2010-08-14 20:19:02
linxi8579
銅蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 3983.2
- 散金: 87
- 帖子: 473
- 在線: 51.8小時(shí)
- 蟲號(hào): 620942
- 注冊(cè): 2008-10-09
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
7樓2010-08-16 11:27:09
8樓2011-08-15 22:12:40
9樓2012-12-12 15:18:18
wangjiaxing1
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 89.1
- 散金: 4
- 紅花: 1
- 帖子: 28
- 在線: 16.5小時(shí)
- 蟲號(hào): 2016051
- 注冊(cè): 2012-09-20
- 專業(yè): 畜牧學(xué)
10樓2013-09-12 10:09:05
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 Silencess 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 281求調(diào)劑（0805） +3 | 煙汐憶海 2026-03-16 | 8/400 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 一志愿天津大學(xué)化學(xué)工藝專業(yè)（081702）315分求調(diào)劑 +7 | yangfz 2026-03-17 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 070300化學(xué)319求調(diào)劑 +4 | 錦鯉0909 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 274求調(diào)劑0856材料化工 +13 | z2839474511 2026-03-11 | 14/700 |
|
|
[考研] 材料工程專碩274一志愿211求調(diào)劑 +6 | 薛云鵬 2026-03-15 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +3 | 淇ya_~ 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研]
 11408 一志愿西電，277分求調(diào)劑
+3
|
zhouzhen654 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 東南大學(xué)364求調(diào)劑 +5 | JasonYuiui 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 333求調(diào)劑 +3 | 文思客 2026-03-16 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 326求調(diào)劑 +4 | 諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)覬?/a> 2026-03-15 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +5 | 素年祭語(yǔ) 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0703一志愿211 285分求調(diào)劑 +5 | ly3471z 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 22408總分284求調(diào)劑 +3 | InAspic 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 288求調(diào)劑 +4 | 奇點(diǎn)0314 2026-03-14 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 本科南京大學(xué)一志愿川大藥學(xué)327 +3 | 麥田耕者 2026-03-14 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿中科院，化學(xué)方向，295求調(diào)劑 +4 | 一氧二氮 2026-03-11 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +6 | Mochaaaa 2026-03-12 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 315求調(diào)劑 +9 | 小羊小羊_ 2026-03-11 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工 309分請(qǐng)求調(diào)劑 +7 | dtdxzxx 2026-03-12 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 化工學(xué)碩306求調(diào)劑 +9 | 42838695 2026-03-12 | 9/450 |
|