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gwd0312木蟲 (正式寫手)
“無冕之王”
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本人是一實驗新手,最近想將一空載體轉到裂殖酵母里面,已經做了好幾次了,沒有一次成功的。有一次平板上長了有十幾個菌落,但是搖菌的時候卻沒有搖起來,這一步做不出來下面的就沒有辦法做,急需高手指教,先謝了!下面是我的實驗參考步驟: (1)劃線復壯宿主菌后,挑1個單克隆菌落于10ml YE液體培養(yǎng)基中,150rpm,28℃振蕩培養(yǎng)過夜。 (2)將培養(yǎng)的菌液按1%轉接到100ml YE液體培養(yǎng)基中,振蕩培養(yǎng)至OD600=0.6-0.8,取出置于冰上20min。 (3)將菌液裝入滅菌的50ml離心管中,4℃ 4000g離心15min,回收菌體。 (4)菌體以10ml冰預冷的1.0M的山梨醇沖洗,在4℃ 4000g離心10min。 (5)反復3-4次。 (6)用3ml預冷的1.2M的山梨醇懸浮。 (7)每100μl分裝后儲存于4℃冰箱備用。 |

木蟲 (正式寫手)
“無冕之王”

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