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gwd0312木蟲 (正式寫手)
“無冕之王”
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[交流]
【求助/交流】求助：高手幫忙 已有2人參與
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本人是一實(shí)驗(yàn)新手，最近想將一空載體轉(zhuǎn)到裂殖酵母里面，已經(jīng)做了好幾次了，沒有一次成功的。有一次平板上長了有十幾個菌落，但是搖菌的時候卻沒有搖起來，這一步做不出來下面的就沒有辦法做，急需高手指教，先謝了！下面是我的實(shí)驗(yàn)參考步驟： （1）劃線復(fù)壯宿主菌后，挑1個單克隆菌落于10ml YE液體培養(yǎng)基中，150rpm，28℃振蕩培養(yǎng)過夜。 （2）將培養(yǎng)的菌液按1％轉(zhuǎn)接到100ml YE液體培養(yǎng)基中，振蕩培養(yǎng)至OD600=0.6－0.8，取出置于冰上20min。 （3）將菌液裝入滅菌的50ml離心管中，4℃ 4000g離心15min，回收菌體。 （4）菌體以10ml冰預(yù)冷的1.0M的山梨醇沖洗，在4℃ 4000g離心10min。 （5）反復(fù)3-4次。 （6）用3ml預(yù)冷的1.2M的山梨醇懸浮。 （7）每100μl分裝后儲存于4℃冰箱備用。 |
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4樓2010-08-16 12:01:11
2樓2010-08-15 11:00:47
gwd0312
木蟲 (正式寫手)
“無冕之王”
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3樓2010-08-16 10:48:57
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