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xiuxiu190318木蟲(chóng) (正式寫手)
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[交流]
【求助/交流】組氨酸標(biāo)簽的設(shè)計(jì) 已有4人參與
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| 我要表達(dá)的蛋白序列需要加一個(gè)組氨酸標(biāo)簽，方便后面的分離純化，請(qǐng)問(wèn)我該怎么加？分離純化后對(duì)標(biāo)簽進(jìn)行切割常用的酶切位點(diǎn)又是怎樣的呢？（最好能舉例說(shuō)明，非常感謝） |
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lxj341401
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2樓2010-08-21 08:27:38
xiuxiu190318
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His在N段還是在C段要看你的看蛋白來(lái)決定。 就我目前的經(jīng)驗(yàn)來(lái)看多數(shù)在N段的都設(shè)計(jì)有蛋白酶切位點(diǎn)，而C段的都直接加入終止密碼子不要了。His標(biāo)簽也無(wú)需自己加，你可以選擇兩端都帶標(biāo)簽的，比如pET28，上游使用Nco I 就不會(huì)在N段有標(biāo)簽了。下游引物不要加終止密碼子，同時(shí)引入蛋白酶切點(diǎn)。什么酶看你自己選擇了。有4度切的Thrombin就不錯(cuò)，TEV Pre都行。酶切的buffer也多少有些差別，自己選擇吧 |
4樓2010-08-21 09:40:34
xiuxiu190318
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5樓2010-08-21 09:53:51
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6樓2010-08-21 09:57:03
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7樓2010-08-21 10:16:56
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