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[交流]
【求助/交流】組氨酸標(biāo)簽會(huì)影響酶活嗎？
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現(xiàn)象：目的蛋白加了His-tag后，發(fā)現(xiàn)酶活降低了 請(qǐng)問(wèn)有必要切除標(biāo)簽嗎？ |
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scelab(金幣+5):熱心蟲(chóng)友，歡迎多來(lái)交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-09-11 23:03:48
tutufei(金幣+3):謝謝 2010-09-15 17:40:57
scelab(金幣+5):熱心蟲(chóng)友，歡迎多來(lái)交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-09-11 23:03:48
tutufei(金幣+3):謝謝 2010-09-15 17:40:57
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額，我看的文獻(xiàn)不算少了，還沒(méi)見(jiàn)過(guò)切組氨酸標(biāo)簽的，GST倒是要切。 his-tag就是為了方便純化，又因?yàn)閷?duì)結(jié)構(gòu)影響不大，所以一般不需要切除。 對(duì)酶活有影響，證明組氨酸標(biāo)簽在酶活性中心附近？ 不管怎樣，如果說(shuō)你做的是應(yīng)用方面研究，應(yīng)該重視這個(gè)問(wèn)題，如果做的偏向理論研究，那就忽略掉吧~~ |
2樓2010-09-11 22:06:14
dianaofyezi
金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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★ ★
amisking(金幣+2):鼓勵(lì)一下！ 2010-09-12 09:17:14
tutufei(金幣+2):謝謝 2010-09-15 17:41:08
amisking(金幣+2):鼓勵(lì)一下！ 2010-09-12 09:17:14
tutufei(金幣+2):謝謝 2010-09-15 17:41:08
| his之所以用的廣泛如2樓所說(shuō)是因?yàn)榧兓�，也有�?jiàn)過(guò)his影響蛋白結(jié)構(gòu)的，但是畢竟是少數(shù)的個(gè)例。不知道你說(shuō)對(duì)酶活的影響，如果確實(shí)是因?yàn)閔is的原因，可以考慮更換帶有hisi的載體，有些載體是N和C端都有his的，有些事N或者C端的。你嘗試下更換了酶活還會(huì)降低么，如果結(jié)果不同了，那么你就可以考慮2樓說(shuō)的his處于酶活位點(diǎn)附近，可以?shī)Z研究研究了。 |
3樓2010-09-12 00:23:40
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