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pumpkin236鐵蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】NIH3T3細(xì)胞培養(yǎng) 已有2人參與
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最近老板讓養(yǎng)NIH3T3細(xì)胞，就找熟人復(fù)蘇了一瓶NIH3T3細(xì)胞，但是關(guān)于該細(xì)胞的性質(zhì)不是很清楚。該熟人是用胎牛血清養(yǎng)的，而我再ATCC上看的描述是禁止用胎牛血清，最好用小牛血清。。。所以比較疑惑。。。 還有幾個問題 1消化傳代時胰酶的用量，以及消化到什么程度就可以終止消化（0.25%胰酶-0.02%EDTA） 2消化后是直接吸走胰酶直接加培養(yǎng)基吹打，然后分裝。還是吹打后還要離心，然后再加培養(yǎng)基分裝呢 3接種密度是多少？昨天我加入2ml的培養(yǎng)基吹打，然后接種了500微升到新培養(yǎng)瓶中，但是發(fā)現(xiàn)長的比較慢 3NIH3T3細(xì)胞到底什么狀態(tài)才算狀態(tài)好啊 急求各位用經(jīng)驗的高手指教下 |
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小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
lstt09nk(金幣+5):好熱心啊~贊~ 2010-09-17 17:00:33
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
lstt09nk(金幣+5):好熱心啊~贊~ 2010-09-17 17:00:33
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你好。之所以用小牛血清，ATCC也講得很清楚，胎牛血清成分較小牛更多，有些因子會影響3T3細(xì)胞的正常生長或者引起變異。時間太久，我記得不太清楚了，你可以查一下。不過一開始我也是用胎牛養(yǎng)的，后來看了說明書就趕緊改用了。 總之我這么折騰過后也沒什么大變化，還比較正常。這個細(xì)胞挺好養(yǎng)的，跟平時養(yǎng)的貼壁細(xì)胞沒啥區(qū)別。T25的瓶，長80%-90%傳代，用gibico或者sigma的商品化胰酶0.5-1ml都可以，時間長短。鏡檢看到細(xì)胞都變圓了，就終止。不鏡檢么就在操作臺燈下觀察，輕微傾斜細(xì)胞瓶時，貼壁細(xì)胞開始有沙狀脫落就可以開始終止了。我是直接加培養(yǎng)液終止吹打的。你的胰酶配方跟我一樣，所以吹打完建議離個心，因為有EDTA。不離心也可以，就是細(xì)胞會貼壁會越來越不牢。接種密度，就一傳三沒有什么問題，長得還比較快，密度高些么長得確實快些，它也有群體效應(yīng)。至于3T3細(xì)胞什么狀態(tài)算好，一是形態(tài)要對，可以跟ATCC上的圖作對比，二是看細(xì)胞消化下來是否透亮，貼壁時邊緣是否清晰，三是貼壁算不算牢，四是生長速度跟ATCC說明是否一致，這些很多都是靠經(jīng)驗，久了自然明白。如果還不能確定，那就拿個敏感藥物檢測下它的敏感性。 多養(yǎng)養(yǎng)，自然它就適應(yīng)新環(huán)境了。除非本身種不好，你是從別人那里拿來的，這個很不好說，傳了多少代了，還保不保持原有的特性，對你的實驗有沒有影響，這些都是個問號。如果項目真的很重要，就去ATCC買，不要抱僥幸心理，如果沒那么講究，那就將就用吧。 |
2樓2010-09-17 12:26:22
pumpkin236
鐵蟲 (小有名氣)
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3樓2010-09-18 10:20:12
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