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lianyi1989金蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】3'RACE求助
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| 最近在做兩條基因的RACE，一條已經(jīng)搞定，另外一條5'也已經(jīng)出來了，但是3'卻一直卡著，卡了一個(gè)月了~這個(gè)3'已經(jīng)出條帶了，但是測序總不對(duì)，有polyA和UPM，但是找不到上游引物，和原來的序列也拼接不上，重做了兩次，測序結(jié)果都是這樣...然后就重新設(shè)計(jì)引物，已經(jīng)5條了，但是就是彌散，連條帶都沒有了~ cDNA應(yīng)該是沒問題的，因?yàn)榱硗庖粭l基因都出結(jié)果了，用的clontech的smarter的盒子，程序和體系都是按說明說上推薦來的，也應(yīng)該不會(huì)有什么問題，現(xiàn)在真不知道是哪有問題，請(qǐng)各位蟲友們給給意見，急死了~另外，我這3'真是做不出來的話，有沒有別方法可以得到全長？我的基因全長是1600bp左右，現(xiàn)在已經(jīng)得到了1200多了，就差3'那邊的300—400bp的了。謝謝大家啦~ |
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lhwei1987
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2樓2010-10-04 21:45:43
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lianyi1989(金幣+1):謝謝參與
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3樓2010-10-04 21:52:57
lianyi1989
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8樓2013-09-12 00:19:52
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9樓2013-09-29 08:51:06
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那么短應(yīng)該很容易啊，你確定它有polyA嗎？如果有，設(shè)計(jì)一個(gè)好的上游引物一下就出來了，或者設(shè)計(jì)兩個(gè)上游引物做一下半套式 [ 發(fā)自小木蟲客戶端 ] |
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liubolin94510樓2013-09-29 09:35:07
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