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lianyi1989金蟲(chóng) (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】3'RACE求助
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| 最近在做兩條基因的RACE,一條已經(jīng)搞定,另外一條5'也已經(jīng)出來(lái)了,但是3'卻一直卡著,卡了一個(gè)月了~這個(gè)3'已經(jīng)出條帶了,但是測(cè)序總不對(duì),有polyA和UPM,但是找不到上游引物,和原來(lái)的序列也拼接不上,重做了兩次,測(cè)序結(jié)果都是這樣...然后就重新設(shè)計(jì)引物,已經(jīng)5條了,但是就是彌散,連條帶都沒(méi)有了~ cDNA應(yīng)該是沒(méi)問(wèn)題的,因?yàn)榱硗庖粭l基因都出結(jié)果了,用的clontech的smarter的盒子,程序和體系都是按說(shuō)明說(shuō)上推薦來(lái)的,也應(yīng)該不會(huì)有什么問(wèn)題,現(xiàn)在真不知道是哪有問(wèn)題,請(qǐng)各位蟲(chóng)友們給給意見(jiàn),急死了~另外,我這3'真是做不出來(lái)的話,有沒(méi)有別方法可以得到全長(zhǎng)?我的基因全長(zhǎng)是1600bp左右,現(xiàn)在已經(jīng)得到了1200多了,就差3'那邊的300—400bp的了。謝謝大家啦~ |
鐵桿木蟲(chóng) (正式寫手)
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金蟲(chóng) (小有名氣)
銅蟲(chóng) (小有名氣)
新蟲(chóng) (初入文壇)
新蟲(chóng) (初入文壇)
金蟲(chóng) (正式寫手)
新蟲(chóng) (初入文壇)
金蟲(chóng) (正式寫手)
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那么短應(yīng)該很容易啊,你確定它有polyA嗎?如果有,設(shè)計(jì)一個(gè)好的上游引物一下就出來(lái)了,或者設(shè)計(jì)兩個(gè)上游引物做一下半套式 [ 發(fā)自小木蟲(chóng)客戶端 ] |
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星光燦爛xt 2026-03-12 | 6/300 |
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