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[交流]
【求助/交流】PCR求助，做不出來找不到原因 已有4人參與
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做了兩個多周的PCR了，非常郁悶。是以霉菌基因組為模板做PCR的。共設(shè)計了四對引物，PCR三個基因。（其中有一對引物是PCR基因加上它上下游的）。發(fā)現(xiàn)都沒有目的帶。 1，模板質(zhì)量應(yīng)該沒問題，跑過電泳，電泳大小在12K左右；OD600：OD800=1.81 2，引物設(shè)計，用Primer Premier設(shè)計的，有三組引物得分很高，與模板配對的引物長度為17~~20bp 3，PCR酶，DNTP，buffer沒問題。用其他模板引物做過陽性對照，所以PCR得不到目的片段肯定是模板或引物的問題。 PCR產(chǎn)物雜帶很多，曾經(jīng)對大小差不多的條帶回收酶切驗證，仍然得不到目的基因。是不是還是引物的問題？我應(yīng)該如何設(shè)計下一階段的實驗方案？ 謝謝！ |
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2樓2010-10-26 09:51:53
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amilie030312
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8樓2010-10-26 12:11:08
9樓2010-10-26 12:49:15
10樓2010-10-26 12:58:35
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