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[交流]
【求助/交流】PCR求助，做不出來找不到原因 已有4人參與
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做了兩個(gè)多周的PCR了，非常郁悶。是以霉菌基因組為模板做PCR的。共設(shè)計(jì)了四對(duì)引物，PCR三個(gè)基因。（其中有一對(duì)引物是PCR基因加上它上下游的）。發(fā)現(xiàn)都沒有目的帶。 1，模板質(zhì)量應(yīng)該沒問題，跑過電泳，電泳大小在12K左右；OD600：OD800=1.81 2，引物設(shè)計(jì)，用Primer Premier設(shè)計(jì)的，有三組引物得分很高，與模板配對(duì)的引物長(zhǎng)度為17~~20bp 3，PCR酶，DNTP，buffer沒問題。用其他模板引物做過陽(yáng)性對(duì)照，所以PCR得不到目的片段肯定是模板或引物的問題。 PCR產(chǎn)物雜帶很多，曾經(jīng)對(duì)大小差不多的條帶回收酶切驗(yàn)證，仍然得不到目的基因。是不是還是引物的問題？我應(yīng)該如何設(shè)計(jì)下一階段的實(shí)驗(yàn)方案？ 謝謝！ |
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9樓2010-10-26 12:49:15
amilie030312
金蟲 (正式寫手)
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2樓2010-10-26 09:51:53
yixuanwin
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- 專業(yè): 基因組學(xué)
3樓2010-10-26 09:57:03
4樓2010-10-26 10:32:30
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