 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1267 | 回復(fù): 4 | |||
kakaqa銅蟲(chóng) (初入文壇)
|
[交流]
【求助/交流】有關(guān)克隆方面的問(wèn)題 已有4人參與
|
|
本人在做兩個(gè)基因的克隆，使用Takara的EXtaq擴(kuò)增出了DNA全長(zhǎng)，分別為1800bp和3000bp左右，使用pMD18-T載體做T-A克隆。 1800bp左右的菌液PCR得到了和我目的條帶一致的條帶，送樣測(cè)序結(jié)果找不到引物，經(jīng)過(guò)BLAST比對(duì)后發(fā)現(xiàn)根本不是我要的目的條帶，很困惑，為什么測(cè)序的結(jié)果找不到引物呢，是不是因?yàn)闆](méi)連接上�；蛘呤俏腋揪蜎](méi)擴(kuò)出目的條帶？可是測(cè)序結(jié)果總要找到引物啊。我的連接體系是1μl載體，4μlDNA, 5μl SoulutionⅠ，16℃連接了1天，按道理來(lái)說(shuō)1800bp左右的片段連接過(guò)夜就可以了，為什么1天了也連接不上啊。 另外想問(wèn)一下3000bp的片段takara的載體不是很好連啊，我都做了2次了，都是沒(méi)有結(jié)果，郁悶死了，哪位高手能提供點(diǎn)意見(jiàn)啊。 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有147人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線(xiàn)
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專(zhuān)業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 克隆過(guò)程出現(xiàn)的問(wèn)題
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 關(guān)于Kan板克隆的問(wèn)題
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 一個(gè)關(guān)于水稻基因圖位克隆的問(wèn)題誠(chéng)摯懇求大牛解答
已經(jīng)有35人回復(fù)
- 分子克隆連接問(wèn)題！
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 關(guān)于多克隆抗體制備的有關(guān)問(wèn)題
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 與16S克隆文庫(kù)有關(guān)的問(wèn)題
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 基因克隆問(wèn)題~~
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于分子克隆的技術(shù)問(wèn)題，很糾結(jié)！
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于基因克隆寫(xiě)文章的問(wèn)題
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 【求助/交流】有關(guān)蛋白純化及其基因克隆的問(wèn)題！請(qǐng)大家?guī)椭?/a>
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 【求助/交流】求助基因克隆方面的問(wèn)題解決方案
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 【求助/交流】關(guān)于PCR克隆片段連接問(wèn)題
已經(jīng)有4人回復(fù)
yanliruqun
新蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 17.7
- 帖子: 6
- 在線(xiàn): 43分鐘
- 蟲(chóng)號(hào): 717013
- 注冊(cè): 2009-03-07
- 性別: GG
- 專(zhuān)業(yè): 植物遺傳學(xué)
2樓2010-11-03 23:27:13
sai00fuji
金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 1049.4
- 散金: 673
- 紅花: 3
- 帖子: 504
- 在線(xiàn): 130.4小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 470099
- 注冊(cè): 2007-11-29
- 專(zhuān)業(yè): 生物化學(xué)
3樓2010-11-04 14:52:24
playboy723
金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 783.3
- 帖子: 352
- 在線(xiàn): 43.3小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 344753
- 注冊(cè): 2007-04-14
- 性別: GG
- 專(zhuān)業(yè): 遺傳學(xué)和分子生物學(xué)
★ ★ ★ ★
小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
dhd997(金幣+3):good 2010-11-04 18:30:35
小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
dhd997(金幣+3):good 2010-11-04 18:30:35
|
發(fā)表下看法： 1、不建議用EXtaq，這個(gè)酶擴(kuò)短點(diǎn)兒的片段還行，1000bp以上就會(huì)出現(xiàn)很多錯(cuò)配了，即使連上了也沒(méi)法用，找個(gè)pfu系列的高保真酶擴(kuò)吧，我用takara公司的primerstar酶擴(kuò)3000bp沒(méi)有錯(cuò)配或缺失，建議你用這個(gè) 2、1800bp連T載體效率已經(jīng)很低了，3000bp連的話(huà)基本靠運(yùn)氣，成功率極低，不過(guò)你可以不斷的試，直到連上為止。建議你分成2段來(lái)擴(kuò)，分別連到T載體上，測(cè)序成功后再連到一起，這樣把握大些。 3、PCR時(shí)退火溫度高些較好，沒(méi)有非特異的雜帶，另外操作時(shí)盡量要嚴(yán)謹(jǐn)，避免出現(xiàn)不明的現(xiàn)象。 |
4樓2010-11-04 15:44:21
friend.11
金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 429
- 散金: 811
- 帖子: 653
- 在線(xiàn): 120.6小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 590424
- 注冊(cè): 2008-08-31
- 專(zhuān)業(yè): 分析儀器與試劑
5樓2010-11-04 19:33:09
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 kakaqa 的主題更新
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
