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[交流]
【求助/交流】這退火溫度怎么算啊 已有5人參與
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| 各位高手：我設(shè)計的引物，上游加了GC夾子，公司給的TM值是86度，下游引物沒有夾子。退火溫度為53度。這退火溫度怎么算�。恐x謝指教 |
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三磷酸腺苷
鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
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2樓2010-11-28 11:44:37
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fjt198719
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這是我第三次回復類似問題了
★ ★ ★
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
amisking(金幣+2):鼓勵交流！ 2010-11-28 15:26:26
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
amisking(金幣+2):鼓勵交流！ 2010-11-28 15:26:26
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本人從來不計算TM值，因為一般都是直接把目的基因全部擴增出來，設(shè)計引物都是直接手寫，酶切位點當然要用軟件分析下才選擇的（載體上有，目的基因上無，雙酶切效果好點的），擴增200-3000片段全部沒得問題。SOE-PCR也沒的問題，就是直接融合5個片段也沒的問題，設(shè)計的中間融合引物都是50bp跟30bp的引物一起擴增，剛剛的（這里引物合成單上寫的50bp的引物退火溫度都是80度左右，30bp的是65左右，而我擴增的退火溫度是57度，可以看出來單子上寫的沒用）。 本人粗略認為退火溫度只與目的菌株的GC含量有關(guān) |
6樓2010-11-28 13:18:10
7樓2010-11-28 19:07:16
天使托
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8樓2010-11-28 22:38:05
9樓2010-11-29 16:27:56
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