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lhm_hnyj金蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】PCR效果問題 已有6人參與
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小蟲最近用昆蟲COII的通用引物對一批一個樣本進行了擴增（基因組之前用cytb、COI通用引物分別進行了擴增，效果不錯），25ul體系：10*buffer2.5ul，2.5mMdNTP2ul，10UM引物各0.5ul，taq酶1U，模板與之前擴cytb等一致，0.5ul； 退火溫度分別采用了46-52度梯度，另外還采用了文獻方法，先46度退火6個循環(huán)，再52度30循環(huán)（不知道是什么原理），結果電泳效果大家都一致，均為較弱的涂抹帶。大家能幫忙分析分析可能是哪方面的問題嗎？有沒有可能得到改進呢  圖片右起依次為DL2000marker，空白，46、48、50、52退火及兩步退火產(chǎn)物 |
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我又提高溫度跑了梯度，還是涂抹帶，同時用了另一對引物，那對引物出了亮帶
10樓2010-12-13 20:05:25
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