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lhm_hnyj金蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】PCR效果問(wèn)題 已有6人參與
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小蟲最近用昆蟲COII的通用引物對(duì)一批一個(gè)樣本進(jìn)行了擴(kuò)增（基因組之前用cytb、COI通用引物分別進(jìn)行了擴(kuò)增，效果不錯(cuò)），25ul體系：10*buffer2.5ul，2.5mMdNTP2ul，10UM引物各0.5ul，taq酶1U，模板與之前擴(kuò)cytb等一致，0.5ul； 退火溫度分別采用了46-52度梯度，另外還采用了文獻(xiàn)方法，先46度退火6個(gè)循環(huán)，再52度30循環(huán)（不知道是什么原理），結(jié)果電泳效果大家都一致，均為較弱的涂抹帶。大家能幫忙分析分析可能是哪方面的問(wèn)題嗎？有沒(méi)有可能得到改進(jìn)呢  圖片右起依次為DL2000marker，空白，46、48、50、52退火及兩步退火產(chǎn)物 |
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6樓2010-12-10 21:29:28
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7樓2010-12-10 21:41:20
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9樓2010-12-10 23:13:45
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我又提高溫度跑了梯度，還是涂抹帶，同時(shí)用了另一對(duì)引物，那對(duì)引物出了亮帶
10樓2010-12-13 20:05:25
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