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tanqian124

銅蟲(chóng) (小有名氣)

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[交流] 【求助/交流】免疫熒光的問(wèn)題。。

我做的是腦組織中受體蛋白的定性試驗(yàn)，二抗用的是FITC標(biāo)記的，然后用熒光顯微鏡觀察，用的藍(lán)色通道，為什么視野中一片漆黑啊。。。

是不是顯微鏡操作的問(wèn)題呢，我是現(xiàn)先在常光下用10X找到我需要的腦區(qū)，然后換成40X的定位視野，然后把常光關(guān)掉，調(diào)到藍(lán)色通道，為什么看不到呢？是不是還要調(diào)節(jié)什么呢。。

請(qǐng)大家指教一下很急啊。。。

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1樓 2010-12-19 09:30:47

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三磷酸腺苷

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dhd997(金幣+1):有道理 2010-12-19 15:52:08
tanqian124(金幣+1): 2010-12-20 22:15:12
tanqian124(金幣+1): 2011-01-14 15:21:10

引用回帖:

Originally posted by tanqian124 at 2010-12-19 13:59:22:

恩對(duì)它發(fā)出的光是綠色的但是要用藍(lán)色光道激發(fā)它

哦哦~可能不同顯微鏡標(biāo)識(shí)的不一樣
另外我覺(jué)得你可以做個(gè)陽(yáng)性對(duì)照
看看是不是抗體本身的問(wèn)題，以及是不是你方法學(xué)的問(wèn)題

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4樓2010-12-19 15:24:17

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三磷酸腺苷

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tanqian124(金幣+1):謝謝參與
dhd997(金幣+1):GOOD 2010-12-19 10:14:43
tanqian124(金幣+1): 2010-12-19 13:59:29

FITC不是黃綠色的么……
另外FITC淬滅很快的，要嚴(yán)格避光，有必要的話還得加抗淬滅劑

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2樓2010-12-19 10:04:53

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Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-12-19 10:04:53:
FITC不是黃綠色的么……
另外FITC淬滅很快的，要嚴(yán)格避光，有必要的話還得加抗淬滅劑

恩對(duì)它發(fā)出的光是綠色的但是要用藍(lán)色光道激發(fā)它

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3樓2010-12-19 13:59:22

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Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-12-19 15:24:17:

哦哦~可能不同顯微鏡標(biāo)識(shí)的不一樣
另外我覺(jué)得你可以做個(gè)陽(yáng)性對(duì)照
看看是不是抗體本身的問(wèn)題，以及是不是你方法學(xué)的問(wèn)題

我看的是5——HT3B受體的表達(dá) 可能是這個(gè)3B的問(wèn)題吧因?yàn)樗麄冏鯬CRwestern 都不是很好出結(jié)果。。。我再試試吧

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5樓2010-12-20 22:16:28

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