lianyi1989

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 949.4
帖子: 67
在線: 23.4小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 841536

[交流] 【求助/交流】熒光定量pcr求助

最近剛剛做熒光定量，但是結(jié)果總是不好，有一點(diǎn)就是老達(dá)不到平臺(tái)期，已經(jīng)40個(gè)循環(huán)了，模板量已經(jīng)加到2ul(20ul體系)，但還是不行，不知道是為什么，達(dá)不到平臺(tái)期出來(lái)模板量低不知道還有沒(méi)有其他原因？請(qǐng)各位能幫忙分析下，謝了！

回復(fù)此樓

» 猜你喜歡

不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線已經(jīng)有0人回復(fù)
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)? 已經(jīng)有172人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千” 已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI” 已經(jīng)有0人回復(fù)
納米粒度分析已經(jīng)有3人回復(fù)
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京已經(jīng)有0人回復(fù)
留學(xué)--博士招生已經(jīng)有16人回復(fù)
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限已經(jīng)有4人回復(fù)
邵陽(yáng)學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑已經(jīng)有0人回復(fù)

» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:

相對(duì)定量PCR求助已經(jīng)有16人回復(fù)
【求助/交流】熒光定量PCR與半定量的RT－PCR在設(shè)計(jì)引物時(shí)有什么區(qū)別？已經(jīng)有8人回復(fù)
【求助/交流】熒光定量pcr出現(xiàn)直線擴(kuò)增曲線，求指導(dǎo) 已經(jīng)有5人回復(fù)
【求助/交流】求助，關(guān)于熒光定量PCR問(wèn)題已經(jīng)有5人回復(fù)
【求助/交流】關(guān)于做熒光定量pcr的模板問(wèn)題已經(jīng)有12人回復(fù)
【求助/交流】熒光定量PCR引物跨內(nèi)含子的問(wèn)題已經(jīng)有9人回復(fù)
【求助/交流】熒光定量PCR中組織保存問(wèn)題已經(jīng)有15人回復(fù)
【求助/交流】熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)品制備及拷貝數(shù)計(jì)算已經(jīng)有3人回復(fù)
【求助/交流】實(shí)時(shí)熒光定量pcr的問(wèn)題已經(jīng)有7人回復(fù)
求助交流熒光定量PCR基線偏下已經(jīng)有5人回復(fù)
【求助/交流】熒光定量PCR敏感度差是什么原因？探針?lè)?/a> 已經(jīng)有6人回復(fù)

【求助/交流】熒光定量pcr 已經(jīng)有11人回復(fù)

» 搶金幣啦！回帖就可以得到:

查看全部散金貼

1樓 2010-12-23 14:58:18

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

love_st

金蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)

MolEPI: 1
應(yīng)助: 48 (小學(xué)生)
金幣: 285.4
帖子: 1596
在線: 1538.2小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 743235

lianyi1989(金幣+1): 2010-12-23 19:33:35

上圖唄，還有，為什么非得到平臺(tái)，只要有平臺(tái)的趨勢(shì)就可以了

贊一下

回復(fù)此樓

2樓2010-12-23 16:52:56

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

在雨中

金蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)

MolEPI: 3
應(yīng)助: 27 (小學(xué)生)
金幣: 371.6
帖子: 2186
在線: 654小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 669605

★
rainwander(金幣+1):鼓勵(lì)積極參與~~~ 2010-12-23 18:54:35
lianyi1989(金幣+1): 2010-12-23 19:33:40

我曾經(jīng)碰到過(guò)類似的問(wèn)題。
如果你的模板沒(méi)有問(wèn)題的話，是不是可以考慮下你的PCR mix的質(zhì)量。

贊一下(1人)

回復(fù)此樓

3樓2010-12-23 18:28:23

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

lianyi1989

金蟲(chóng) (小有名氣)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 949.4
帖子: 67
在線: 23.4小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 841536

引用回帖:

Originally posted by love_st at 2010-12-23 16:52:56:
上圖唄，還有，為什么非得到平臺(tái)，只要有平臺(tái)的趨勢(shì)就可以了

就是到最后指數(shù)期還沒(méi)完呢~這結(jié)果肯定沒(méi)法用啊

贊一下

回復(fù)此樓

4樓2010-12-23 19:33:25

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

sutao1979

木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)

應(yīng)助: 5 (幼兒園)
貴賓: 0.694
金幣: 3553.3
帖子: 1479
在線: 64小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 79951

★ ★
scelab(金幣+2):歡迎多來(lái)交流！:tiger06: 2010-12-23 23:31:15
lianyi1989(金幣+1): 2010-12-25 11:07:13

這種情況和cDNA的quality有很大的關(guān)系，先看看你的reference gene怎么樣？如果也是ct 的value很高的話，或者沒(méi)有，那一定是cDNA的問(wèn)題
qcpr兩個(gè)因素很重要1：cDNA quality2：primer，可以從melting curve判斷

贊一下(1人)

回復(fù)此樓

5樓2010-12-23 20:28:58

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

jurkat.1640

至尊木蟲(chóng) (文壇精英)

MolEPI: 1
應(yīng)助: 908 (博后)
金幣: 17177
帖子: 14525
在線: 2184.9小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 514340

樣品的濃度不夠吧

贊一下

回復(fù)此樓

7樓2010-12-23 22:09:31

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

lovenlong

銅蟲(chóng) (小有名氣)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 121.6
帖子: 55
在線: 37小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1031886

好似你的體系有問(wèn)題哦！

lianyi1989(金幣+1): 2010-12-28 10:56:23

1.樓主的體系用的模板量是多少？各個(gè)反應(yīng)管是否一致?按照標(biāo)準(zhǔn)的PCR體系來(lái)配，同時(shí)結(jié)合你用的試劑說(shuō)明書(shū)來(lái)配體系，一般不會(huì)有太大問(wèn)題。我做的10微升的體系一般10~30ng的模板就夠了。
2.達(dá)不到平臺(tái)期，有時(shí)候很難講清楚原因的�？赡苣阃瑯拥捏w系有時(shí)能行有時(shí)又不行，細(xì)節(jié)不好把握。我上個(gè)月58度退火做得很好，昨天就不行了，今天換57度退火做了兩次，第二次才行，不知道為啥。
3.最好是先做個(gè)梯度摸一摸退火溫度，不然就來(lái)個(gè)Touch Down吧。個(gè)人感覺(jué)退火溫度經(jīng)常是沒(méi)P好的主要原因。至于鎂離子什么的定量可以少去考慮。
4.先配反應(yīng)母液再分裝，做三個(gè)以上重復(fù)測(cè)試體系可能會(huì)對(duì)你的實(shí)驗(yàn)有好處，特別是你以后做著做著老出問(wèn)題的時(shí)候很煩的。

補(bǔ)充：如果PCR達(dá)不到平臺(tái)期，定量結(jié)果很難看的，基本上沒(méi)用。。。

[ Last edited by lovenlong on 2010-12-27 at 14:37 ]

贊一下(1人)

回復(fù)此樓

8樓2010-12-27 14:36:22

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

lianyi1989

金蟲(chóng) (小有名氣)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 949.4
帖子: 67
在線: 23.4小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 841536

引用回帖:

Originally posted by lovenlong at 2010-12-27 14:36:22:
1.樓主的體系用的模板量是多少？各個(gè)反應(yīng)管是否一致?按照標(biāo)準(zhǔn)的PCR體系來(lái)配，同時(shí)結(jié)合你用的試劑說(shuō)明書(shū)來(lái)配體系，一般不會(huì)有太大問(wèn)題。我做的10微升的體系一般10~30ng的模板就夠了。
2.達(dá)不到平臺(tái)期，有時(shí)候很難 ...

謝謝~我體系基本是按試劑說(shuō)明書(shū)來(lái)配的，就是加大了模板的量而已，退火溫度我是做普通pcr提前摸好的，感覺(jué)問(wèn)題應(yīng)該不大，上面有同學(xué)說(shuō)可能是模板質(zhì)量有問(wèn)題，我現(xiàn)在就在懷疑是不是真是我模板質(zhì)量的問(wèn)題...據(jù)你做的經(jīng)驗(yàn)，有沒(méi)有可能是這種原因呢？

贊一下

回復(fù)此樓

9樓2010-12-28 11:11:02

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

楊芷

新蟲(chóng) (初入文壇)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 8.5
帖子: 1
在線: 2.6小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 2415464

★
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖

我做的熒光定量也是這種問(wèn)題，我做的是白細(xì)胞介素2的表達(dá)量，引物換了幾個(gè)都不太行，各位大仙有做過(guò)的，幫忙指點(diǎn)下，感激不盡。在線等候

贊一下

回復(fù)此樓

10樓2013-04-13 13:58:39

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

凌波麗

專家顧問(wèn) (知名作家)

★ ★
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
myprayer: 金幣+1, 贈(zèng)人玫瑰手有余香，鼓勵(lì)應(yīng)助，分子生物版塊期待你的更多精彩。 2013-04-22 08:57:41

我覺(jué)還是應(yīng)該從PCR的專一性不夠角度找原因，尤其是引物的設(shè)計(jì)。

贊一下

回復(fù)此樓

11樓2013-04-16 23:38:32

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

xanxus18

新蟲(chóng) (初入文壇)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 0.5
帖子: 4
在線: 5.3小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 1728695

樣品濃度不夠

回復(fù)此樓

12樓2013-04-21 20:51:10

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

簡(jiǎn)單回復(fù)

dashu-973326樓

2010-12-23 21:04 回復(fù)

最具人氣熱帖推薦 [查看全部]	作者	回/看	最后發(fā)表

[考研] 348求調(diào)劑 +3	小懶蟲(chóng)不懶了 2026-03-28	3/150	2026-03-29 00:39 by 544594351
[考研] 材料學(xué)碩333求調(diào)劑 +10	北道巷 2026-03-24	10/500	2026-03-28 23:06 by 無(wú)際的草原
[考研] 本科新能源科學(xué)與工程，一志愿華理能動(dòng)285求調(diào)劑 +7	AZMK 2026-03-28	11/550	2026-03-28 21:01 by xxxsssccc
[考研] 生物學(xué)學(xué)碩，一志愿湖南大學(xué)，初試成績(jī)338 +6	YYYYYNNNNN 2026-03-26	7/350	2026-03-28 20:52 by 唐沐兒
[考研] 材料與化工272求調(diào)劑 +9	阿斯蒂芬2004 2026-03-28	9/450	2026-03-28 15:21 by 1018329917
[考研] 0703化學(xué) +10	妮妮ninicgb 2026-03-27	10/500	2026-03-28 14:07 by 噠噠噠呱呱呱
[考研] 0703化學(xué)/290求調(diào)劑/本科經(jīng)歷豐富/工科也可 +9	丹青奶蓋 2026-03-26	10/500	2026-03-28 07:45 by barnett0632
[考研] 331環(huán)境科學(xué)與工程求調(diào)劑 +3	熠然好運(yùn)氣 2026-03-27	3/150	2026-03-28 04:11 by fmesaito
[考研] 0703化學(xué)求調(diào)劑，各位老師看看我�。。� +5	祁祺祺 2026-03-25	5/250	2026-03-27 21:44 by 東方豬豬
[有機(jī)交流] 高溫高壓反應(yīng)求助 10+4	chibby 2026-03-25	4/200	2026-03-27 21:08 by BT20230424
[考研] 266求調(diào)劑 +11	陽(yáng)陽(yáng)哇塞 2026-03-27	12/600	2026-03-27 17:56 by yu221
[考研] 272求調(diào)劑 +7	腳滑的守法公民 2026-03-27	7/350	2026-03-27 17:23 by laoshidan
[考研] 一志愿北京化工大學(xué) 070300 學(xué)碩 336分求調(diào)劑 +9	vv迷 2026-03-22	9/450	2026-03-27 15:59 by 不吃魚(yú)的貓
[考研] 調(diào)劑 +3	李嘉圖·S·路 2026-03-27	3/150	2026-03-27 11:19 by wangjy2002
[考研] 一志愿南京郵電大學(xué) 288分材料考研求調(diào)劑 +3	jl0720 2026-03-26	3/150	2026-03-26 13:39 by zzll406
[考研] 0854人工智能方向招收調(diào)劑 +4	章小魚(yú)567 2026-03-24	4/200	2026-03-25 13:29 by 2177681040
[考研] 調(diào)劑 +4	13853210211 2026-03-24	4/200	2026-03-24 19:44 by ms629
[考研] 材料專碩331求調(diào)劑 +4	鮮當(dāng)牛 2026-03-24	4/200	2026-03-24 15:58 by JourneyLucky
[考研] 333求調(diào)劑 +3	ALULU4408 2026-03-23	3/150	2026-03-23 19:04 by macy2011
[考研] 接收2026碩士調(diào)劑(學(xué)碩+專碩) +4	allen-yin 2026-03-23	6/300	2026-03-23 15:04 by 汪��？！