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北京石油化工學(xué)院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告

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hutingting

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[交流] 【求助/交流】PCR后只有模板

我PCR之后，做酶切，連接，轉(zhuǎn)化，挑了單克隆送測(cè)序，發(fā)現(xiàn)我P的那段只有模板，沒(méi)有我要擴(kuò)展的那幾個(gè)堿基？這是怎么回事��？

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1樓 2010-12-29 18:48:31

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xuexue1204

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首先，你的表達(dá)好像不太準(zhǔn)確，是回收的PCR產(chǎn)物在進(jìn)行連接，在做后面的實(shí)驗(yàn)吧，。你可以咨詢下測(cè)序公司，看看是哪里出了問(wèn)題，測(cè)序也不是所有的堿基都能準(zhǔn)確的測(cè)出，也有發(fā)生錯(cuò)誤的幾率

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2樓2010-12-29 20:46:37

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wangying052

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是不是引物的問(wèn)題，看你的表達(dá)好像是問(wèn)題出在了PCR上。。。

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3樓2010-12-29 21:23:42

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06233053

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沒(méi)連接上？

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4樓2010-12-29 21:37:10

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你做每一步都做個(gè)PCR驗(yàn)證下，就不會(huì)出現(xiàn)上述情況了

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5樓2010-12-29 21:38:30

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表述不是很清楚啊，發(fā)現(xiàn)我P的那段只有模板，沒(méi)有我要擴(kuò)展的那幾個(gè)堿基，是什么意思？

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6樓2010-12-30 10:05:41

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沒(méi)連上吧？？？

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7樓2010-12-30 19:02:18

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我也沒(méi)大看明白，PCR不就是要擴(kuò)模板上的序列嗎？你的意思是你在引物中加入了新的序列？

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8樓2010-12-30 21:48:47

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連接后再做酶切鑒定和PCR鑒定

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9樓2010-12-31 08:40:25

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引用回帖:

Originally posted by Michael008 at 2010-12-30 21:48:47:
我也沒(méi)大看明白，PCR不就是要擴(kuò)模板上的序列嗎？你的意思是你在引物中加入了新的序列？

是的我是在引物中引入了一個(gè)堿基

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10樓2011-01-05 10:06:53

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nigel.lin

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建議再挑幾個(gè)單克隆去測(cè)序。如果還是那樣，應(yīng)該是引物問(wèn)題。。

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11樓2011-01-05 10:21:03

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小木蟲(chóng)(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流

把保護(hù)堿基多加幾個(gè)，可能是掉了

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12樓2011-01-05 10:56:34

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說(shuō)錯(cuò)了，我們一般采用PCR的方法，不用連接，因?yàn)榧拥膲A基個(gè)數(shù)太少

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13樓2011-01-05 10:57:50

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