20040359

Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-01-22 20:14:00:

沒(méi)有定數(shù)，不過(guò)你說(shuō)的范圍也可以
最好是以剛好能看見(jiàn)為宜，不過(guò)為了保證每次都能擴(kuò)出來(lái)，就再往上加多一兩個(gè)循環(huán)

半定量不是比較各個(gè)樣品條帶的亮度嗎？以剛好能看見(jiàn)為宜是什么程度

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7樓2011-01-23 10:23:03

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三磷酸腺苷

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Originally posted by xnbioinfor at 2011-01-23 10:23:03:

半定量不是比較各個(gè)樣品條帶的亮度嗎？以剛好能看見(jiàn)為宜是什么程度

是啊，但是你好好去看一下PCR動(dòng)力學(xué)方面的材料就知道，只有在指數(shù)期比較才是最準(zhǔn)確的
然而一般跑膠能看見(jiàn)條帶的時(shí)候，指數(shù)期都快過(guò)半了，如果再往后進(jìn)入線性期甚至平臺(tái)期，那么就會(huì)得出假陰性的結(jié)果

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8樓2011-01-23 10:30:48

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zycly86

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Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-01-23 10:30:48:

是啊，但是你好好去看一下PCR動(dòng)力學(xué)方面的材料就知道，只有在指數(shù)期比較才是最準(zhǔn)確的
然而一般跑膠能看見(jiàn)條帶的時(shí)候，指數(shù)期都快過(guò)半了，如果再往后進(jìn)入線性期甚至平臺(tái)期，那么就會(huì)得出假陰性的結(jié)果

如果我想比較誘導(dǎo)表達(dá)處理不同時(shí)間的基因表達(dá)量，那摸索循環(huán)數(shù)是以哪個(gè)樣品的條帶為準(zhǔn)呢？比如樣品有ABA處理0h 1h�。玻琛。常琛。础。琛。担琛。颐餮h(huán)數(shù)該以哪個(gè)時(shí)間為準(zhǔn)呢？畢竟不同樣品的目的基因的表達(dá)量不同，模板量也不同

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9樓2011-01-23 17:26:47

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三磷酸腺苷

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Originally posted by zycly86 at 2011-01-23 17:26:47:

如果我想比較誘導(dǎo)表達(dá)處理不同時(shí)間的基因表達(dá)量，那摸索循環(huán)數(shù)是以哪個(gè)樣品的條帶為準(zhǔn)呢？比如樣品有ABA處理0h 1h�。玻琛。常琛。础。琛。担琛�，我摸索循環(huán)數(shù)該以哪個(gè)時(shí)間為準(zhǔn)呢？畢竟不同樣品的目的基因 ...

這種情況啊，用中間那個(gè)吧
一般比較兩個(gè)的話，就以預(yù)期高的那個(gè)為準(zhǔn)

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10樓2011-01-23 17:32:33

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yucheng9255

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Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-01-22 15:13:36:
是比較多。要摸一個(gè)最佳循環(huán)數(shù)，以跑膠剛好能看見(jiàn)為宜

不是以剛好看見(jiàn)為宜吧，一般以選擇上升期的中間數(shù)作為最佳循環(huán)數(shù)

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11樓2011-01-23 19:52:30

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三磷酸腺苷

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Originally posted by yucheng9255 at 2011-01-23 19:52:30:

不是以剛好看見(jiàn)為宜吧，一般以選擇上升期的中間數(shù)作為最佳循環(huán)數(shù)

當(dāng)跑膠都可以看見(jiàn)的話……指數(shù)期都一半左右了吧~
在實(shí)時(shí)定量中可以看到，閾值一般都在起峰后不久那里

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12樓2011-01-23 21:45:48

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