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baggio00009

銅蟲(chóng) (小有名氣)

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[交流] 【求助/交流】求助，新手組培及細(xì)胞懸浮培養(yǎng)

大家好，我是新手做組培及細(xì)胞培養(yǎng)，有幾個(gè)問(wèn)題想問(wèn)問(wèn)大家。
1.我想問(wèn)問(wèn)做MS培養(yǎng)基的時(shí)候激素應(yīng)該在滅菌之前加還是之后加？要是在滅菌之后加比較好的話，應(yīng)該如何操作才能不染菌呢
2.我做的植物在懸浮細(xì)胞培養(yǎng)繼代的時(shí)候，我通常是過(guò)濾后取一定重量的細(xì)胞放入新培養(yǎng)基中，但是這種植物細(xì)胞很難過(guò)濾，很費(fèi)時(shí)間，所以經(jīng)常會(huì)染菌，我很郁悶，不知道我這么做對(duì)不對(duì)，是不是有其他的什么解決辦法。
3. 有沒(méi)有細(xì)胞懸浮培養(yǎng)方面比較好的書(shū)或者材料推薦一下，最好是實(shí)驗(yàn)方面的。不勝感激

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1樓 2011-02-15 22:06:13

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jiebingzh

木蟲(chóng) (小有名氣)

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看天(金幣+2): 鼓勵(lì) 2011-03-20 18:35:04

如果所加激素在經(jīng)過(guò)高壓滅菌后失活，則需要將培養(yǎng)基先高壓后再添加過(guò)濾滅菌的激素，然后將培養(yǎng)基搖勻并進(jìn)行分裝。這樣操作量好控制。
細(xì)胞懸浮培養(yǎng)應(yīng)該是用槍頭來(lái)吸取一定體積的吧，具體的沒(méi)操作過(guò)

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13樓2011-03-20 17:41:40

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wqj1988926

金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

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dhd997(金幣+3): good 2011-02-16 10:39:34
baggio00009(金幣+1): 2011-02-16 17:25:06
baggio00009(金幣+1): 2011-02-22 17:59:17

1.我們實(shí)驗(yàn)室一般都是加好后高溫滅菌的
2.如需定量的話，將天平置于超凈臺(tái)紫外照射滅菌后，將培養(yǎng)器皿整體放入調(diào)零，定量初始細(xì)胞量
3關(guān)于書(shū)籍方面可以去你們的圖書(shū)館看看，我一般在我們圖書(shū)館能滿足我的需求。

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2樓2011-02-16 08:45:32

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ziman2003

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baggio00009(金幣+1): 2011-02-16 17:24:58
baggio00009(金幣+1): 2011-02-18 02:00:21
dhd997(金幣+2): 歡迎交流 2011-02-18 10:54:02
baggio00009(金幣+1): 2011-02-22 17:59:09

您好！
我在研究生階段做了大量的組培工作，主要是愈傷和誘導(dǎo)的過(guò)程。
首先，對(duì)于你說(shuō)的激素的問(wèn)題，所有的激素，包括生長(zhǎng)素，細(xì)胞分裂素等等，都是需要0.22um的過(guò)濾器除菌過(guò)濾。然后待滅菌后的培養(yǎng)基室溫涼至45度左右，加入激素。因?yàn)榧に卦诟邷叵氯菀捉到獾摹?br /> 其次，我沒(méi)有做過(guò)細(xì)胞的懸浮培養(yǎng)，你可以找一些組織培養(yǎng)教材看看。好像本科的組織培養(yǎng)教材中就有描述，或者有關(guān)組培的實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)技術(shù)。
希望對(duì)你有所幫助。

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3樓2011-02-16 16:38:15

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dacaoyuan5330

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baggio00009(金幣+1): 2011-02-18 02:00:15

好像有本書(shū) 專(zhuān)門(mén)介紹怎樣做細(xì)胞培養(yǎng)的暫時(shí)忘記了過(guò)后告訴你

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4樓2011-02-16 17:22:26

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